蛋白质与酶工程第六章酶的固定、修饰与改造祥解.ppt

（二）酶基因常用的克隆方法 1. 根据已知序列克隆基因： 2. 根据已知探针克隆基因： 3. 未知序列的基因打靶： （1）随机引物PCR； （2）差别显示PCR（DD-PCR）; （3）代表性差式分析PCR（RAD-PCR；一种差减杂交）。 （三）酶的异源表达 1. 酶基因在原核生物中的表达 （1）原核生物基因表达系统的特点 ① 只有一种RNA聚合酶； ② 表达是以操纵子为单位的； ③ 转录与翻译偶联，是连续进行的； ④ 一般不含内含子； ⑤ 基因表达控制主要在转录水平； ⑥ 大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上含有真核生物缺乏的转译起始密码子及SD序列。 （2）原核生物基因表达载体： （3）影响原核生物基因表达系统表达效率的因素：很多；如启动子结构、转译起始序列、启动子同克隆基因间的距离、质粒拷贝数及稳定性等等。 2. 外源基因在真核细胞中的表达： 真核生物表达载体（主要是穿梭载体）、受体细胞（如酵母细胞、植物细胞、动物细胞、昆虫细胞等）。 3. 酶异源表达的应用 非常广泛。 （1）农业：作物改良（抗病、抗虫、抗逆等）； （2）工业：生产用酶的制造。 （3）医学： （4）环境保护： （5）能源： 二、酶分子的改造 （一）酶的定点突变 （二）酶分子定向进化 （一）酶