蛋白质组学研究技术进展祥解.pptVIP

由于iTRAQ 试剂是由一系列C、N、O 的稳定同位素组合而成，其基本分子结构没有发生变化，不同标记试剂标记的相同肽段在物理化学特性上没有差异，因而其色谱保留时间和质谱离子化效率也基本一致，从而保证经不同标记试剂标记后的相同肽段能同时进行质谱分析。iTRAQ试剂标记好的多肽在进行一级质谱分析时不发生断裂，在二级质谱检测前进行碰撞诱导解离，此时iTRAQ 试剂的报告基团和平衡基团发生断裂，产生的报告基团用于后续的定量分析，平衡基团由于中性丢失无法被检测，反应基团则仍偶联在肽段的N 端。 等量不同来源的蛋白样品（一般每个样品100ug）经过还原烷基化、胰酶消化成肽段后，分别用带有不同大小报告基团的iTRAQ 试剂进行标记。待标记反应完全之后，将不同报告基团标记的肽段等量混合，利用多维液相色谱对混合肽段进行分离，最终进入质谱进行定性和定量分析。由于标记的肽段的理化性质基本一致，因此不同样品来源的同一肽段将被同时洗脱和离子化。 实验流程 在进行一级质谱检测时，不同报告基团标记的同一肽段的分子量一致，在谱图中叠加成一个峰，从而便于质谱仪进行母离子选择。在进入二级质谱检测时，母离子碎裂成一系列的碎片离子及报告离子，碎片离子则可以用于肽段的序列鉴定，产生的报告离子则可用于蛋白的定量分析，通过比较不同分子量大小的报告离子质谱峰强度来对不同样品来源的肽段进行定量比较。 苹果酸脱氢酶 四分体： C1