复发性涎腺腺样性癌裸鼠移植瘤模型的建立及其生物学特性.pdf

中文 摘 要 复发性涎腺腺样龚性癌裸鼠移植瘤模型的建立及其 生物学特性 摘 要 目的:涎腺腺样囊性癌(adenoidcysticcarcinoma)又名圆 柱瘤 (cylindroma)，是一种较常见的涎腺恶性肿瘤。该肿瘤 具有侵袭性强，浸润性生长，早期沿神经、血管束向远处扩 展、转移等特征。手术治疗难以彻底切除，术后局部复发率 较高，远期疗效差。目前临床对于原发性涎腺腺样囊性癌的 治疗仍以手术切除为主。但对于复发性涎腺腺样囊性癌的治 疗仍有一定难度，没有有效的治疗措施。且涎腺腺样囊性癌 复发后，肿瘤细胞分散、穿插在纤维中生长，肿瘤内纤维结 缔组织成份较多，而肿瘤细胞成份较少，与原发性肿瘤在形 态结构和生长方式上有很大的差别。因此，复发性涎腺腺样 囊性癌移植瘤模型的建立也是比较困难，属于难以移植成功 的涎腺恶性肿瘤模型之一。目前国内外，尚未见复发性涎腺 腺样囊性癌裸鼠移植瘤模型建立的报道。本实验中，我们采 用了人复发性涎腺腺样囊性癌，进行裸鼠皮下接种和移植瘤 传代，建立了裸鼠移植瘤模型。为临床探讨复发性涎腺腺样 囊性癌的治疗和相关的基础研究，提供了一个较为理想的实 验模型和对象。 材料与方法:1材料 (1)组织来源:患者来自一名45 岁的女性，胯部复发性肿块，于2004年2月9日入院。病 理诊断:腮部腺样囊性癌复发。移植标本取自复发性涎腺腺 样囊性癌手术新鲜标本。(2)实验动物:5只 5PF级雌性 中文 摘 要 Balb/。裸小鼠，4-5周龄。2方法:(1)标本的处理:在无 菌条件下，切取标本，立即置于含1000U/ml青霉素、500gg/ml 链霉素的培养液中30分钟。在无菌条件下，去除周围正常 组织及坏死的肿瘤组织、血块及包膜，剪成1mm3左右大小 的组织块，放于新鲜培养液中备用。(2)动物麻醉:腹腔 内注射 0.28%的戊巴比妥钠溶液 0.2-0.3m1/只。(3)接种过 程:麻药注射数分钟后，麻药显效，切开裸鼠右前和左后背 部皮肤，用眼科镊将剪好的1mm 左右大小的肿瘤组织块置 入皮下，5/0的可吸收线缝合。(4)移植瘤传代:待裸鼠体 内移植瘤直径生长至5mm左右时，将裸鼠断颈处死，无菌 剥离瘤体，按原代瘤移植法进行下一代裸鼠接种、传代。并 同时留取移植瘤标本进行鉴定。(5)组织学观察:来自患者 的复发性肿瘤和各代移植瘤标本分别经 10%福尔马林固定 后，石蜡包埋，切片厚度S[IM，行HE染色，多功能显微镜 AX-80下观察拍照。(6)免疫组织化学:切片脱蜡入水后， 正常山羊血清孵育，单克隆鼠抗人低分子量角蛋白(CK8) 和单克隆鼠抗人平滑肌肌动蛋白(Actin)1:50，二抗和ABC 各为1:100,DAB显色，透明封固，多功能显微镜AX-80下 观察拍照。(7)细胞培养:取第3代的移植瘤组织块，剪碎 置于培养瓶中，RPMI-1640培养液培养数周。待肿瘤细胞爬 出，贴壁，收集呈对数生长的瘤细胞，进行染色体鉴定。(8) 染色体检查:采用秋水仙素将移植瘤细胞终止于细胞分裂中 期，观察染色体核型。 结果:1.移植瘤生长情况:人复发性涎腺腺样囊性癌组 织移植于1只裸鼠获原代移植成功。2年以来，移植瘤在裸 鼠间连续传代4次，共移植Balb/c裸鼠5只。其平均潜伏期、 - 一 一 ~，，.，，， z 中文 摘 要 肿瘤体积倍增时间和传代间隔分别为44.33天、11.37天、 149.1天。原代移植 1-9周内，瘤块逐渐缩小、消失，此时 测量肿瘤大小作为基础值。成活的肿瘤经过3-9周潜伏期后 开始生长，到第20周，肿瘤直径增加约 1倍，其平均体积 明显大于基础值。肿瘤体积倍增时间是20.23天，首次传代 间隔为24周。以后随着传代次数的增加，肿瘤的生长速度 及潜伏期均比原代明显缩短。 2.形态学观察:(1)肉眼观察:移植瘤包膜完整，表面光滑， 呈圆形或椭圆形，个别瘤体表面呈结节状。剖面实性，灰白 色，质地匀细。(2)光镜观察:肿瘤细胞呈圆形或多边形， 胞浆红染。胞核圆形，居中，核大而深染，核浆比例增大， 异型性明显，核分裂像易