牙龈卟啉单胞菌入血管内皮细胞后粘附分子表达及信号调控的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 牙龈卟啉单胞菌侵入血管内皮细胞后 粘附分子表达及信号调控的研究 目的 牙周炎是一种由菌斑细菌引发的慢性感染性疾病，是人类口腔两大疾病之一， 发病率较高。大量的研究显示慢性牙周炎己成为心血管疾病的独立危险因素，使 以往的理论认为AS主要是局部脂质堆积性疾病，近年来，AS发病机制的炎症观点 又重新被强调。目前研究认为AS是一个进行性的炎症反应，局部和远隔部位感染 可以促进AS的慢性炎症过程。由于AS病因复杂，既包括与脂蛋白代谢有关的基因， 也包括环境因素的影响，且病变发生较慢，在早期无症状，故对其病因和发病机 制的研究进展仍然较慢。而大多数的牙周疾病是可以预防和控制的，有效的牙周 治疗、积极的控制口腔感染为我们提供了一条减少心血管疾病发生危险的可能途 径。 牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas 性牙周炎重要可疑致病菌，它的多种毒性因子可引发宿主的免疫炎症反应，导致 牙龈组织破坏和局部血管改变，使菌血症发生的可能性和严重性大大增加。 Gibson等的动物实验研究显示P gingivalis通过口腔感染载脂蛋白E缺陷小鼠可增 r…j匕够进入血液循环系统， 加早期AS和血管炎症的发生。还有研究表明尸gmgtvahs 进而粘附、侵入血管内皮细胞，并在细胞内增殖，这使尸gingivalis感染与AS疾病 的联系更加密切。同其他血管壁细胞一样，血管内皮细胞可能作为户gingivalis菌 体或菌体成分的储存库，在尸gingivalis感染机体的过程中刺激机体产生免疫炎症 反应。 在AS疾病发生过程中，血管内皮细胞是单核细胞粘附聚集的关键部位，细胞． 细胞、细胞．基质I’日J相互粘附、相互作用几乎贯穿了AS的整个病理过程，因此了解 引起细胞问相互作用的因素及机理，采取相应的措施，对防治血管病发生、发展 有着重要意义。细胞间粘附的分子基础是粘附分子表达，在体内讵常细胞不表达 或仅轻微表达粘附分子，在AS斑块部位发现内皮细胞活化，大量表达细胞粘附分 子，包括细胞间粘附分子1(intercellularadhesionmolecule1，ICAM．1)、血管细 celladhesionmolecule 胞粘附分子1(vascular 1，VCAM一1)和E选择素等，其作用 主要是通过识别并结合对方细胞膜上的特异性配体而完成细胞间的粘附。内皮细 胞分泌的粘附分子对AS病变的形成和发展有重要作用。 我们推测Pgingivalis侵入血管内皮细胞可导致粘附分子高表达的AS样改变。 本研究建立尸gingivalis侵入血管内皮细胞模型，模拟Pgingivalis感染血管壁细 表达的变化，探讨Pgingivalis在AS疾病发生中的可能作用，并进一步完成调控 细胞粘附分子表达的信号通路的初探。 材料与方法 一、实验材料 33277(由首都医科大学口腔医学院科研所提供) 尸gingivalis低毒力株ATCC 和高毒力株W83(由美国佛罗里达大学牙科学院口腔生物研究所Dr．LamontILl教 umbilical 授惠赠)，人脐静脉血管内皮细胞(human vainendothelialcell，HUVEC) 株ECV304(购自南京凯基生物科技开发有限公司)，甲基噻哗基四哗(methyl thiazolyl 晶美生物技术有限公司)，碘化丙啶(propidium 试剂盒(Qiagen)，RNA提取试剂Trizol (TaKaRa)，鼠抗人ICAM．1单克隆抗体(SantaCruz)，兔抗人VCAM．1、E选择素 多克隆抗体(SantaCruz)，兔p．肌动蛋白(actin)多克隆抗体(北京博奥森生物 MAPK、NF．KB 技术有限公司)，鼠抗人IKB．0【、磷酸化p38 p65单克隆抗体(Santa Cruz)，碱性磷酸酶标记的羊抗鼠或羊抗兔IgG(北京博奥森生