血管内皮生长因基因转染恢复放疗后组织血管生成的实验研究.pdf

英文臻写 VEGF vascularendothelialfactor growth 血管内皮嫩长因子 VEGFRvascularendothelialfactor growth receptor 矗管内皮生长因子受傣 PCR reverse chainreaction transcdptionpolymerase 多聚酶链式反应 RT-pCRreverse chainreaction polymerase transcription 逆转录多浆瓣链式反应 cD№≮ DNA complementary 互补DNA base bp‘ pair 碱基对 kb kilibases 千碱基 endothelial EC cell 内皮细胞 endothelialcell VEC vascular 盘管痰痰绥蕤 revolutionminute per 转／分 血管内皮生长因子基因转染恢复放疗后组织 血管生成的实验研究 全文摘要 日的构建血管内皮生长因子基因的真核表达质粒：应用血管内皮生 长因子基因体内转染的方法恢复放疗后组织血管生成能力。 方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT．PCR)技术，从人肝癌细胞 株SMMC．7721中扩增出血管内皮生长因子VEGFl65基因片段，用DNA 重组技术将VEGFl65 eDNA定向插入pcDNA3真核表达载体上，构建成 GFt65重组质粒，并用酶切电泳分析、PCR扩增电泳分析及 peDNA3／VE DNA测序的方法对重组质粒进行鉴定：应用脂质体介导的基因转染方法 将重组质粒pcDNA3／VEGFl65导入体外培养的大鼠成肌细胞内，采用免 疫组化的方法观察其在细胞内的表达；选40只成年雄性Wistar大鼠右后 肢为照射部位进行照射，每只大鼠放射总量为30GY，放疗完成后，行 颈总动脉插管血管造影检查模型大鼠两侧后肢血管数目的变化，取两侧 的后肢肌肉组织标本行血管密度、平均截面积、平均管径及血管超微结 构检查，以确定软组织血管放疗损伤模型是否建立；用肌肉多点注射转 染的方法将重组质粒pcDNA3／VEGFl65转移至放疗损伤模型大鼠右后肢 放疗损伤区肌细胞内，而左侧后肢作为治疗对照组转染空质粒 pcDNA3，每次每只大鼠转染质粒200扯g，共治疗2次，间隔2周，治疗 结束后行VEGFl65mRNA表达检测、VEGF蛋白检测、微血管密度、平 均截面积、平均管径测定、血管超微结构观察以及血管造影等检查，以 确定VEGF基因转染治疗后恢复软组织血管放疗损伤的效果。