神经生长因子在鼠牙髓机械刺激后表达变化的研究.pdf

中文摘要 前 言 了神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)是1948年Buker发 现将小鼠肉瘤组织移人鸡胚体壁可以使移植区感觉神经节数增加 后，Levi一M和Ham发现的一种可在血液中扩散的因子。它由靶 组织产生，与支配靶组织的神经元轴突末梢的膜受体特异结合，形 成复合物进人轴浆，经逆行转运到胞体和核。在此过程中诱发一 系列生物效应。 NGF是神经系统最重要的生物活性分子之一，它是交感神经 元、感觉神经元和中枢部分胆碱能神经元的营养因子。有实验显 示NGF不仅参与大鼠牙髓神经纤维生长发育，而且对牙冠外型发 育起重要调节作用。并且NGF在牙髓感觉神经纤维的生长发育 中起重要促生长作用。其次，NGF还影响非神经系统，如免疫、造 血、生殖、内分泌等系统的功能。 目前人们对NGF在牙齿发育中作用报导很多，而在牙健受损 伤、炎症及修复过程中的研究，特别是应用免疫组化方法直接检测 牙髓损伤、炎症修复中NGF的表达变化国内尚未见报道，而对于 NGF在牙髓及三叉神经节中表达的相互关系，国内外也无报导沙 本研究的目的是利用免疫组化方法研究牙齿受到机械刺激后 牙髓中的NGF表达变化，以及在牙髓和三叉神经节中表达的相互 关系。 材料与方法 16只大白鼠被用来观察双侧上领磨牙受机械刺激后的变化， 4只用于正常对照，4只受刺激后立即观察,4只鼠受刺激后3天 观察，另4只刺激后5天观察。达到所要求的天数后，鼠被处死， 应用4%的多聚甲醛液心脏灌流，取上领骨及三叉神经节，上领骨 需经脱钙处理，之后将上领骨及三叉神经节置于20%的蔗糖磷酸 盐缓冲液中脱水，4℃过夜，待组织块沉底，经OCT包埋，使用恒冷 切片机切片，厚度为17pm，矢状连续切片6张，其中4张进行免疫 组化染色，另2张做HE染色。使用光镜观察NGF在神经节及牙 髓中的分布，并使用Luzex一F显微图象分析仪测定三叉神经节及 牙髓中NGF的阳性细胞和阳性部位的灰度值(光强度)，结果进行 统计学分析。 结 果 l,(1)正常对照组免疫组化染色后可见三叉神经节细胞中有 个别细胞NGF染色阳性，牙髓中NGF染色阴性。HE染色见造牙 本质细胞排列整齐。 (2)0小时组三叉神经节中NGF阳性细胞增多，牙髓中 NGF表达为弱阳性，HE染色可见牙髓中造牙本质细胞排列紊乱。 (3)3天组三叉神经节中NGF阳性细胞达到最多，且染色 最深，牙髓中NGF强阳性表达，主要分布在成牙本质细胞层冠方， 在相应牙本质小管中可见阳性着色，同时牙髓中造牙本质细胞排 列紊乱，并出现空泡性变。 (4)5天组三叉神经节中阳性细胞明显减少，牙髓中N留 表达弱阳性，HE染色可见牙髓中造牙本质细胞排列较正常。 2、图象分析检测各组大鼠三叉神经节中及牙益中阳性细胞和 阳性区域的灰度值，经统计学分析结果为:机械刺激后3天组三又 神经节及牙髓中阳性细胞和部位灰度值明显低于其它各组，0小 时组和5天组灰度值略低于正常组。 讨 论 神经生长因子作为神经营养因子(neurotrophinfactorNTFS) 家族最先发现的成员，是神经系统最重要的生物活性分子之一。 NGF兼有神经营养因子与促神经突起生长因子双重作用，它能促 进外周感觉和交感神经元及中枢胆碱能神经元的存活并诱导神经 元的分化和成熟及维持其生理功能。对神经细胞的生长发育、分 化、发挥调节作用，是参与神经再生和修复的重要因素。有实验显 示NGF不仅参与大鼠牙髓神经纤维生长发育，而且对牙冠外型发 育起重要调节作用。而且NGF在牙髓感觉神经纤维的生长发育 中起重要促生长作用。 牙髓炎、牙体损伤及过敏等的主要临床症状以及预后都与牙 髓中的神经递质密切相关，炎症组织的修复过程在很大程度上可 看作是组织发育过程的重复。本实验中NGF在正常对照组牙髓 中表达呈阴性，机械刺激后0小时组和3天组的三叉神经节和牙 髓内NGF阳性细胞和阳性部位的灰度值较正常组低，即损伤后即 刻和3天时，NGF的分泌明显增加，损伤5天