血管紧张素ⅱ对外培养人牙髓细胞生物学特性影响的实验研究.pdfVIP

目 录 中文摘要………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………4 研究论文 血管紧张素II对体外培养人牙髓细胞生物学特性影响的 实验研究 前言………………………………………………………………………．．8日U舌………………………………………………………………………．．芍 材料与方法………………………………………………………………8 结果……………………………………………………………………．．13；口7K……………………………………………………………………··1J 附图……………………………………………………………………．．15 附表……………………………………………………………………．．21 讨论……………………………………………………………………．．23 结论……………………………………………………………………。27 参考文献………………………………………………………………．．27 综述与牙髓干细胞迁移相关趋化因子的研究现状……………………30 致谢…………………………………………………………………………．38 个人简历……………………………………………………………………．．39 中文摘要 血管紧张素Ⅱ对体外培养人牙髓细胞生物学特性影响的 实验研究 摘 要 目的：通过组织块酶消化法进行人牙髓细胞的原代培养以获得大量 可供实验用的牙髓细胞，建立人牙髓细胞的体外研究模型。研究不同浓度 II对体外培养人牙髓细胞增殖效应、细胞周期进程、迁移等一系列 的Ang 生物学活性的影响。 方怯： 1选取符合纳入标准的新鲜拔除健康牙(均经患者知情同意)，在无 菌条件下拔出牙髓组织，通过组织块酶消化法进行牙髓细胞的原代培养， 显微镜下观察组织块的解离情况，细胞的形态学表现和生长状态，待细胞 生长融合达80％铺满瓶底后，用O．25％胰酶消化按1：1进行细胞首次传代， 以后传代按1：3比例进行，取生长状况良好的第4代人牙髓细胞，胰酶消化 后制备成细胞悬液进行细胞爬片，用SABC法进行波形蛋白和角蛋白免疫 组化染色鉴定细胞来源。HE染色观察细胞的组织学形态。 2取生长状态良好的第4代人牙髓细胞，0．25％胰酶消化，用含15％胎 种于96孔板，每孔加液量200“L。随机分为五个实验组和一个对照组，每 组复五孔。恒温培养箱内培养24h，弃孔内原培养液，PBS缓冲液冲洗3遍。 组加入等量的含5％胎牛血清的DMEM培养液。放入培养箱内继续培养， 内孵育2h，酶标仪上450nm波长处测各孔吸光度值(oD值)。 3取生长状态良好的第4代人牙髓细胞，用0．25％的胰蛋白酶消化后， 组，每组复三瓶，培养箱中培养24h。弃瓶内原培养液，PBS缓冲液冲洗3 中文摘要 10。7mol／LII溶液，对照组加入等量含5％胎牛血清的DMEM培养液继续 Ang 培养牙髓细胞48h，消化，离心，收集细胞，加入．200C预冷70％的乙醇， 40C过夜固定样本，按照细胞周期试剂盒说明书操作，应用流式细胞仪检 测分析AngII对牙髓细胞的DNA合成，细胞周期进程的影响。 4 白酶消化，1 小室的上室内。恒温培养箱内培养24h，显微镜下观察到细胞贴壁状态良 好后，换用含l％胎牛血清的DMEM培养液培养牙髓细胞24h进行细胞周 期同步化处理，弃原孔内培养液，DMEM培养液冲洗，随机分为五个实 验组和一个对照组。实验组及对照组所有孔的上室内均加入100taL不含血 DMEM培养液配制的不同 清的DMEM培养液，实验组下室内加入6009L II 溶液，对照组下室内加入等量DMEM培养液，继续培养24h。显微镜下 观察细胞生长状况，下室内有无牙髓细胞。用眼科镊取出Transwe