发酵工程制药实验-链霉菌发酵.docVIP

实验2灰色链霉菌的活化 学习制备高氏一号培养基的方法以及斜面接种技术。 高氏一号基是一种合成培养基，用于培养。 1. 菌种：； 2. 培养基3. 器材：天平、500mL刻度量杯、小刀、牛角匙、玻棒、纱布、18m180mL试管、棉花、电炉、烧杯、记号笔、酒精灯、接种环等。 1培养基的制备 ，加热搅拌至琼脂完全熔化，补水至1000mL。趁热分装于18mL×180mL试管，斜面以8mL为宜。分装完毕后，塞好棉塞并将试管捆扎好。高压蒸汽灭菌：121℃灭菌20min，灭菌后趁热摆斜面。 2斜面接种 接种是将纯种微生物，在无菌操作条件下，移植到已灭菌并适宜该菌生长繁殖所需要的培养基中。为了获得微生物的纯种培养，要求接种过程中必须严格进行无菌操作。一般是在无菌室内，超净工作台或实验台酒精灯火焰旁进行。 左手拿，右手拿接种环，将接种环在空白培养基处冷却，挑取菌落，在火焰旁稍等片刻。 左手将放下，拿起斜面培养基。在火焰旁用右手小指和手掌边缘拔下棉塞并夹紧，迅速将接种环伸入空白斜面，在斜面培养基上轻轻划线，将菌体接种于其上。划线时由底部向上划一直线，一直划到斜面的顶部。注意勿将培养基划破，不要使菌体沾污管壁。 灼烧试管口，在火焰旁将棉塞塞上。接种完毕，接种环上的余菌必须灼烧灭菌后才能放下。 斜面置于28℃恒温箱中，培养～d观察结 学习制备培养基的方法以及技术。 种子扩大培养简称种子扩培是发酵工程的一个组成部分，其指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。其目的首先是出于接种量的需要与菌种的驯化，同时对于缩短发酵时间、保证生产水平也有帮助。种子扩培的一般过程是： 　　斜面菌种 → 一级种子培养（摇瓶） → 二级种子培养(种子罐) → 发酵 　　对于种子制备过程，其大致可区分为实验室阶段和生产车间阶段，前期不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此将这一培养过程称为实验室阶段的种子培养。而后期种子培养在种子罐里面进行，一般在工程上归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。并非所有的种子扩大培养都采用从摇瓶到种子罐的二级发酵模式，其实际发酵级数受到发酵规模、菌体生长特性、接种量的影响。世于本世纪30年代，由于其简便、实用，广泛用于微生物菌种筛选、实验室大规模发酵试验、种子培养等。摇瓶培养设备主 1. 菌种：； 2. 培养基20g、0g、g、自来水1000m、pH。 3. 器材：天平、500mL刻度量杯、小刀、牛角匙、玻棒、纱布、mL三角瓶、棉花、电炉、烧杯、记号笔、酒精灯、接种环等。 1培养基的制备 取干净三角烧瓶，分装培养基，用包扎瓶口，再加牛皮纸包扎，在0.1MPa下灭菌min。 将的菌种斜面，在无菌的条件下，注入10mL无菌水，震荡成孢子悬浮液（孢子浓度约为8104个/mL）。待发酵培养基灭菌后冷却到℃时，分别将孢子悬浮液接入三角瓶中，接种量为2mL，标好记号。 ℃、0r/min旋转式摇床培养 学习和掌握摇瓶发酵培养的原理和方法。 链霉素是一种从灰链霉菌的培养液中提取的抗菌素属于氨基糖甙碱性化合物，它与结核杆菌菌体核糖核酸蛋白体蛋白质结合，起到了干扰结核杆菌蛋白质合成的作用，从而杀灭或者抑制结核杆菌生长的作用。链霉素胍由链霉胍、链霉糖和N－甲基-L-葡萄糖胺 生产过程分为两大步骤：发酵，将冷干管或沙土管保存的链霉菌孢子接种到斜面培养基上，于27下培养7天。待斜面长满孢子后，制成悬浮液接入装有培养基的摇瓶中，于27下培养45～48小时待菌丝生长旺盛后，取若干个摇瓶，合并其中的培养液将其接种于种子罐内已灭菌的培养基中，通入无菌空气搅拌，在罐温27下培养62～63小时，然后接入发酵罐内已灭菌的培养基中，通入无菌空气，搅拌培养，在罐温为27下，发酵约7～8天。提取精制，发酵液经酸化、过滤，除去菌丝及固体物，然后中和，通过弱酸型阳离子交换树脂进行离子交换，再用稀硫酸洗脱，收集高浓度洗脱液──链霉素硫酸盐溶液。洗脱液再经磺酸型离子交换树脂脱盐，此时溶液呈酸性，用阴离子树脂中和后，再经活性炭脱色得到精制液。精制液经薄膜浓缩成浓缩液，再经喷雾干燥得到无菌粉状产品，或者将浓缩液直接做成水针剂。 1. 菌种：灰色链霉菌摇瓶种子（由实验获得） 2摇瓶发酵生产培养基：、、MgSO4、2HPO41.6g、 pH7.2。 3. 仪器：500m1三角瓶旋转式摇床 1. 摇瓶发酵培养基的制备 取干净三角烧瓶，分装培养基，用8层纱布包扎瓶口，再加牛皮纸包扎，在℃下灭菌min。 待发酵培养基灭菌后冷却到℃时，。 ℃、0r/min旋转式摇床培养 1. 观察菌丝形态，用试纸测发酵液的pH值，。 2. 试举例说明摇瓶