发酵法制备高活性大豆异黄酮研究.pdf

Y 陵压料技大学 论文题目： 发酵法制备高活性大豆异黄酮的研究 申请学位学科：工学硕士 所学学科专业：生物化工 培 养单位：生命科学与工程学院 硕士生：张俊涛 导师：许牡丹教授 毛跟年副教授 20061年5月 发酵法制备高活性大豆异黄酮的研究 摘 要 大豆异黄酮作为一种功能性食品和药品，是目前世界上研究热 点，大豆胚芽是大豆加工中的副产物，富含大豆异黄酮，是一种未 被利用的资源。本文立足于废弃物的再利用，通过黑曲霉发酵法来 制备高活性的大豆异黄酮。对大豆异黄酮苷元的定性和定量分析、 黑曲霉种子培养基成分的确定、大豆异黄酮苷元固态发酵的工艺和 发酵胚芽基质中大豆异黄酮苷元的提取工艺进行了深入的探讨和研 究。 首先研究了大豆异黄酮苷元的定性和定量的方法。通过大豆异 黄酮类化合物的特征颜色反应，建立了一套快速有效的鉴定大豆异 黄酮类化合物及其不同单体的方法。采用硅胶GF2，。薄层色谱法分离 鉴定了大豆异黄酮苷元。采用薄层．紫外法和HPLC可以检测大豆异 黄酮各单体组分的含量。结果表明，HPLC法最为精确，精密度 此方法的重复性和准确性都令人满意。薄层．紫外法尽管操作步骤复 ％)较好，能够快捷和方便的检测大豆异黄酮苷元的含量。 以B一葡萄糖苷酶酶活力为指标对黑曲霉种子培养基成分进行了 研究。确定了黑曲霉固体种子培养基的成分：麸皮6．89，大豆胚芽 通过单因素试验确立了从发酵胚芽基质中提取大豆异黄酮苷元 的影响因素，并通过正交试验优化了发酵工艺。结果表明，最佳工艺 室温下加入50％无菌水搅拌均匀，接入种龄为36h的黑曲霉种子培 养基49(即接种量为8％)混合均匀，再补加25％的无菌水，以及 10％的无菌麸皮， 混合均匀，于30℃条件下发酵48h。其一次提取 mg／lOOg胚芽提高了近10倍。 针对目前大豆异黄酮浸提得率较低的缺陷，对发酵胚芽基质中 大豆异黄酮苷元的提取工艺进行了研究。正交试验结果表明：采用 80％的乙醇，固液比为1：7，于70℃条件下提取三次，第一次2h， 第二次40min，第三次lOmin，此时异黄酮苷元的得率最高，染料木 黄酮0．315％，黄豆苷元0．738％，总异黄酮苷元得率达到1．053％。 比原料中苷元含量提高了近22倍。 论文根据大豆异黄酮的物理和化学特性，建立了大豆异黄酮及 其主要单体的定性和定量分析的方法。研究了固态发酵制备大豆异 黄酮苷元过程中的各个影响因素，优化了采用黑曲霉发酵制备大豆 ． 异黄酮苷元的工艺条件。并对发酵后胚芽基质中异黄酮苷元的提取 工艺进行了优化。研究结果对大豆异黄酮的合理有效利用提供了有 价值的参考依据，具有一定的理论依据和较大的实际应用价值。 二 关键词：大豆异黄酮苷元，染料木黄酮，黄豆苷元，黑曲霉，发酵 RESEARCHONPREPARATIoN HIGHERACTIVESoYBEAN BYFEMENTATIoN ABSTRACT aretheunutilized in Soybeangerms by-productssoybean in containamountsof