基因工程讲义资料.docVIP

《基因工程实验》讲义 指导教师 林陈水 浙江工业大学药学院 2015年11月 目 录 实验一、质粒DNA的碱裂解法提取与纯化 实验二、DNA分子的限制性内切酶消化 实验三、聚合酶链式反应(PCR)扩增目的DNA 实验四、大肠杆菌感受态细胞制备及质粒DNA转化 实验五、重组外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 实验六、表达蛋白的SDS分析 实验一、质粒DNA的碱裂解法提取与纯化 一、实验目的与内容 1、细菌培养及菌体的收集、裂解。 2、碱裂解法提取质粒DNA。 二、实验原理 细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。 质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子，其重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA分子。目前已有许多方法可用于质粒DNA的提取，本实验采用碱裂解法提取质粒DNA。 碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不复性而呈絮状，离心时可沉淀下来。 纯化质粒DNA