番石榴实蝇性别决定基因Bcotra和Bcotra-2的克隆、序列特征及表达分析.pdfVIP

： 昆虫 学 报ＡｃｔａＥｎｔｏｍｏｌｏｇｉｃａＳｉｎｉｃａ，Ｍａｙ２０１５，５８（５）５１６－５２５ ｄｏｉ：１０１６３８０／ｊｋｃｘｂ２０１５０５００６ 番石榴实蝇性别决定基因Ｂｃｏｔｒａ和 Ｂｃｏｔｒａ２的克隆、序列特征及表达分析 １，２ １ １ １ １ １，３， 刘桂清 ，武　强 ，和丹阳 ，张桂芬 ，李建伟 ，万方浩 （１．中国农业科学院植物保护研究所，植物病虫害生物学国家重点实验室，北京１００１９３； ２．广东省昆虫研究所，广东省野生动物保护和利用公共实验室，广东省农业害虫综合治理重点实验室，广州５１０２６０； ３．青岛农业大学农学与植物保护学院，山东青岛２６６１０９） 摘要：【目的】对番石榴实蝇Ｂａｃｔｒｏｃｅｒａｃｏｒｒｅｃｔａ（Ｂｅｚｚｉ）性别决定基因ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｒ和ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｒ２的ｃＤＮＡ和基因组 ＤＮＡ序列进行克隆和分析，明确这２个基因的结构特征及其在不同发育阶段和雌、雄成虫不同组织中的表达模式， 为进一步的功能研究和番石榴实蝇遗传性别品系（ｇｅｎｅｔｉｃｓｅｘｉｎｇｓｔｒａｉｎ，ＧＳＳ）的建立奠定基础。【方法】利用ＰＣＲ 结合ＲＡＣＥ技术克隆番石榴实蝇２个性别决定基因的ｃＤＮＡ全长和内含子序列，利用不同的生物信息学软件对序 列进行结构预测、序列比对和进化树分析；利用半定量ＲＴＰＣＲ检测这２个基因在番石榴实蝇的不同发育阶段及 雌、雄成虫不同组织（精巢、卵巢、中肠和脂肪体）中的表达分布。【结果】克隆得到番石榴实蝇 ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｒ和 ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｒ２的ｃＤＮＡ全长序列，分别命名为Ｂｃｏｔｒａ和Ｂｃｏｔｒａ２。Ｂｃｏｔｒａ存在性别特异剪接，雌虫Ｂｃｏｔｒａ的ｃＤＮＡ全 长１６７３ｂｐ，其开放读码框（ＯＲＦ）为１２４２ｂｐ，编码４１３个氨基酸（ＧｅｎＢａｎｋ登录号为ＫＰ７１２８７６）；雄虫ＢｃｏｔｒａｃＤＮＡ 全长２０２５ｂｐ，比雌虫多２个外显子，但由于外显子上有多个终止密码子，因此，不能编码完整的有功能的Ｔｒａ蛋白 （ＧｅｎＢａｎｋ登录号为ＫＰ７１２８７７）。Ｂｃｏｔｒａ２不存在性别特异剪接，ｃＤＮＡ全长 １４５８ｂｐ，其开放读码框（ＯＲＦ）为７５６ ｂｐ，编码２５１个氨基酸，具有ＲＮＡ结合蛋白的典型特征（ＧｅｎＢａｎｋ登录号为ＫＭ６５８２０７）。Ｂｃｏｔｒａ２有８个外显子，７ 个内含子。氨基酸序列比对和系统进化关系表明，两个基因的系统发育关系一致，Ｔｒａ２与目前已报道的双翅目 Ｔｒａ２具有很高的同源性，而Ｔｒａ的保守性较Ｔｒａ２要低。半定量ＲＴＰＣＲ结果显示，Ｂｃｏｔｒａ和Ｂｃｏｔｒａ２在番石榴实 蝇的不同发育阶段及雌、雄成虫不同组织中都有表达。【结论】本研究明确了Ｂｃｏｔｒａ和Ｂｃｏｔｒａ２的基因组ＤＮＡ和 ｃＤＮＡ结构特征，Ｂｃｏｔｒａ和Ｂｃｏｔｒａ２在番石榴实蝇的不同发育阶段和成虫不同组织中均有表达，序列分析发现这两 个性别决定基因均具有Ｔｒａ／Ｔｒａ２结合位点、内含子剪接抑制序列位点，其中Ｂｃｏｔｒａ具有ＲＮＡ结合蛋白的结合位 点，暗示了这２个基因可能通过翻译后相互作用调控雌、雄体性发育。Ｂｃｏｔｒａ存在性别特异剪接，雌虫特有的一段 ９６３ｂｐ的内含子序列可以用于番石榴实蝇遗传定性品系的载体构建。 关键词：番石榴实蝇；性别决定；ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｒ；ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｒ２；性别特异剪接；表达谱 中图分类号：Ｑ９６６　　文献标识码：Ａ　　文章编号：０４５４６２９６（２０１５）０５０５１６１０ Ｃｌｏｎｉｎｇ，ｓｅｑｕｅｎｃｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｅｘ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｇｅｎｅｓＢｃｏｔｒａａｎｄＢｃｏｔｒａ２ｉｎｔｈｅｇｕａｖａｆｒｕｉｔｆｌｙ，Ｂａｃｔｒｏｃｅｒａ ｃｏｒｒｅｃｔａ（Ｂｅｚｚｉ）（Ｄｉｐｔｅｒａ：Ｔｅｐｈｒｉｔｉｄａｅ） １，２ １