miR-34c快速老化小鼠海马组织中的表达及其靶基因的初步鉴定.pdf

目 录 中文摘要………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………4 研究论文 miR．34c在快速老化小鼠海马组织中的表达及其靶基因的初 步鉴定 前言……………………………………………………………………………………………7月U吾……………………………………………………………………………………………．’7 材料与方法……………………………………………………………一7 结果…………………………………………………………………………………………．．20 附图……………………………………………………………………22 附表………………………………………………………………………30 讨论…………………………………………………………………………………………．．37 结论…………………………………………………………………………………………．．41 参考文献………………………………………………………………4l 综述衰老和认知障碍的神经机制………………………………………．45 致谢……………………………………………………………………………………………………64 个人简历……………………………………………………………………．65 中文摘要 miR-34c在快速老化鼠海马组织中的表达 及其靶基因的初步鉴定 摘 要 Disease，AD)’是中枢神经系统最 目的：阿尔茨海默症(Alzheimer’S 常见的一种神经系统退行性疾病，主要表现为渐进性记忆障碍、认知功能 障碍、人格改变及语言障碍等神经精神症状，严重影响社会交往、就业与 生活质量，给个人、家庭和社会带来沉重负担。AD的病因和发病机制十 分复杂，至今尚不完全清楚。目前存在多种学说，如氧化应激学说、Ap 级联学说、Tau蛋白假说、线粒体功能障碍学说、基因突变学说和自噬功 mRNA 多个miRNAs在AD的发生、发展过程中发挥的重要调节作用。尽管如此， 失调的miRNAs在AD发生发展中的作用机制尚不完全明确，是当前本领域 Accelerated 研究的热点问题。本研究通过对快速老化小鼠(Senescence PCR和Western 物信息学、Real．time blot等方法，筛选并确定目标miRNAs 及其靶基因，进一步采用荧光素酶实验观察miR-34c对其靶基因突触结合 发展过程中的作用以及开发以miRNAs为靶点的药物提供了新的思路。 方法：①法实验动物：封闭群清洁级快速老化亚系SAMP8及抗快速 accelerated 老化亚系SAMRl(Senescence 路。④能差异性表达miRNA的验证：通过Real．timePCR验证目标miRNA 步通过Real—timePCR坳J]miR-34c在3月龄SAMRld、鼠脑、心、肝、肾等 中文摘要 达及增龄性改变。⑤增利用生物信息学方法进行GO分析，预钡JJmiR一34c 的靶基因可能的生物功能。⑥靶基因的预测及验证：利用mi砌必靶基因 数据库Targetsan 的靶基因，通过Real—time 因蛋白的表达和定位进行分析。⑦行荧光素酶实验：最后通过构建靶基因 HEK．293细胞，通过双荧光素酶检测系统检测荧光素酶活性。⑧胞统计方 法：所有数据采用i妇表示。用SPSS13．0软件进行数据处理，采用方差 分析和独立样本t检验进行统计学分析，以PO．05为有统计学意义。 个表达上调，且以miR．34c表达上调倍数最高，为2．52倍。②。对差异性 参与机体神经营养因子信号通路、轴突导向和突触囊泡循环等信号通路， 以及神经元突触的形成过程。③靶Real—timePCR检测显示，与同龄正常对 的靶基因可能参与