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中间宿主钉螺和钉螺间日本血吸虫的遗传关系 中文摘要 中间宿主钉螺和钉螺间日本血吸虫的遗传关系 中文摘要 目的：血吸虫病是一种流行广泛、严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病，而我 国属于血吸虫病流行最严重国家之一。我国血吸虫病的流行现主要局限于水位难以控 制的湖沼地区和山区。血吸虫因生态环境（如终宿主）不同或选择压力（如化疗）而 形成相应的血吸虫亚群或株，而其传播流行可通过群体遗传学方法进行分析。群体遗 传学方法在血吸虫上已有广泛研究，然而多侧重于地区间或终宿主间的群体遗传结构 分析，而有关中间宿主体内和中间宿主间血吸虫个体间的遗传关系较少。因此，本研 究以前期研究的山区型血吸虫病流行区为现场，通过现场调查感染性钉螺，室内逸出 尾蚴感染小鼠收集虫体，利用微卫星位点对虫体进行基因分型，进而分析血吸虫群体 遗传多样性及钉螺内和钉螺间血吸虫的亲缘关系，有助于深入了解血吸虫的传播特 征，为建立血吸虫病传播动力学数学模型提供参数，同时为有效地控制血吸虫病流行 提供新思路。 方法：从已发表文章中选择 17 对多态性较好、适用于本研究的微卫星引物，对 这些引物进行同一体系和 PCR 反应条件扩增，对扩增不好的引物进行温度梯度 PCR 扩增，对扩增产物进行琼脂糖电泳检测，确定各自最佳退火温度。舍弃扩增不好的引 物，运用余下引物对 3 只钉螺的 41 份血吸虫样本进行 PCR 扩增、琼脂糖电泳检测、 检测片段大小，将结果整理成基因型数据。基于血吸虫个体基因型，检测每对引物是 否能将来自不同钉螺的血吸虫个体鉴别开。舍弃鉴别失败的引物，最终确定用于研究 血吸虫遗传关系的微卫星引物。 将从血吸虫病流行现场（安徽石台地区）采集到的钉螺带回实验室进行逸蚴实验， 鉴别阳性钉螺。将阳性钉螺逸出的尾蚴感染小鼠，收集血吸虫成虫。运用最终确定的 微卫星位点对血吸虫成虫进行基因分型。 对血吸虫基因型数据进行统计分析前，利用 GENECAP 1.2.2 剔除钉螺内相同基 因型的血吸虫。接着利用FSTAT 2.9.3 进行群体遗传多样性分析，包括各位点等位基 因数目、等位基因频率、有效等位基因数目、观察杂合度(Ho)、期望杂合度(He)和近 I 中文摘要 中间宿主钉螺和钉螺间日本血吸虫的遗传关系 交系数(Fis)及其标准差，各位点的多态信息含量(PIC)釆用相关公式计算；对各位点利 用 GENEPOP 4.0 进行哈迪-温伯格平衡检验；对钉螺间血吸虫基因型分布进行 Poisson 分布拟合优度检验（x2 检验）。利用 SPAGeDi 1.3 软件计算钉螺内和钉螺间日本血吸 虫亲缘关系系数；利用 Colony 2.0 进行胞系分析，推断钉螺内和钉螺间日本血吸虫的 胞系关系。 结果： 1. 现场采集 8563 只钉螺，筛选得到 67 只阳性钉螺。阳性钉螺经逸蚴实验，最 终成功感染 46 只小鼠，收集到 472 条血吸虫成虫。 经过引物筛选和条件优化，最终确定 12 对微卫星引物。12 个微卫星位点的等位 基因数从 4 到 25 个不等，平均每个位点上含有 16.7 个等位基因。有效等位基因数的 范围为 1.103-1.922。12 个微卫星位点的观测杂合度范围为 0.005-0.914，平均为 0.633 ； 而期望杂合度的范围为 0.057-0.557，平均为 0.437 ；多态信息含量的范围为 0.1-0.914， 平均为 0.743，除 sjp4 和 sjp22 之外，其余 10 个位点多态信息含量均大于 0.5 。本研 究初步认为筛选出的 12 对微卫星标记适用于日本血吸虫，可以作为其遗传学研究的 良好标记。 2. 12 个微卫星位点近交系数（Fis ）的范围为-0.709-0.779，平均值为-0.365，表 明：sjp22 位点杂合子缺失（Fis0 ），其余 11 个位点均表现为杂合子过剩(Fis0) 。 Hardy-Weinberg 平衡检验表明 12 个位点中只有 3 个位点（sjp32, sjp42, sjp63 ）符合此 平衡（P0.05 ），其余均偏离Hardy-Weinberg 平衡（P0.05) 。Poisson 分布拟合优度检 验显示