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中山大学硕士论文 细胞转化模型在化学致癌物筛查中的应用研究 细胞转化模型在化学致癌物筛查中 的应用研究 专 业： 卫生毒理学 硕士研究生： 唐石伏 导 师： 陈雯教授 单 位： 中山大学公共卫生学院 中文摘要 随着科学技术的发展，越来越多的化学致癌物进入人类的生活和生产领域，其中 很多具有潜在致癌性。目前的人类化学致癌物检测手段由于自身局限性，远不能满足 人类可疑化学致癌物检测R益增长的需要，这促使人们寻找快速有效的检测方法。 细胞转化实验是一种化学致癌活性的短期检测模型，能检测遗传毒性和非遗传毒 性化学致癌物，日益受到人们的关注。本课题组已证实，癌基因高表达人永生化细胞 bronchial 模型如高表达H-Rasw2和c．Myc的永生化人支气管上皮细胞(humanepithelial cell，HBE)具有灵敏度好、能缩短细胞转化间期和检测各种类型的化学致癌物等优点， 是一种具有应用前景的化学致癌物检测手段。 体内外研究表明，细胞恶性转化是一个多阶段、涉及多基因突变的过程。癌基因 高表达通过加速基因突变频率促进细胞恶性转化。DNA修复缺陷能加快细胞基因突变， 理论上也能象癌基因高表达一样促进细胞恶性转化。许多临床资料表明DNA修复缺 陷是肿瘤的重要易感因素之一。核酸切除修复机制中关键基因如ERCCl(excision repair 1)和ERCC2(excision 2)、DNA双 cross—completiongene repaircross—completiongene mutated 链断裂修复机制中关键基因如ATM(ataxia-telangiectasiagene)和错配修复机 制中关键基因如MSH2(mutS 2)的功能缺失均能引起人类肿瘤早发、多发。 homolog 动物研究也表明一些DNA修复基因敲除小鼠是良好的化学致癌活性检测模型【1．4】。除 中山大学硕士论文 细胞转化模型在化学致癌物筛查中的应用研究 此之外，DNA修复缺陷使人上皮细胞对病毒癌基因诱导的细胞转化更加敏感【5，6】。因 此，我们推测，人DNA修复缺陷细胞模型有可能运用于化学致癌活性短期检测系统。 于上述两种类型的细胞株，通过软琼脂克隆形成试验和裸鼠皮下成瘤试验验证不同通 路的DNA损伤修复基因缺陷能否促进细胞转化，比较癌基因高表达和DNA损伤修复 基因缺陷细胞模型在化学致癌活性检测中的效能，进一步完善人细胞转化模型，为人 细胞转化模型的实际应用提供理论依据。 1．研究方法 1．1DNA损伤修复基因缺陷HBE细胞株的建立 采用慢病毒载体介导的siRNA技术在人支气管上皮细胞的基础上构建DNA损伤修 以及恶性转化试验观察所构建细胞株的生物学特性 1．2．DNA损伤修复基因缺陷HBE细胞株DNA损伤修复能力的检测 通过双核微核实验和彗星实验检测所构建DNA损伤修复缺陷细胞株的DNA损伤 修复能力。 1．3 B(a)P诱导细胞转化实验 1．3．1 B(a)P染毒浓度的确定： 和25％IC50作为HBE细胞苯并芘染毒剂量。 1．3．2细胞转化试验 每周染毒一次，连续染毒。染毒后第4周开始每隔两周做一次软琼脂试验：连续两 次软琼脂试验出现阳性结果后进行裸鼠皮下成瘤试验。 2．结果 2．1 DNA损伤修复基因缺陷HBE细胞株的建立 中