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中文摘要 1,25-(OH) D 对1 型糖尿病的防治作用及其机制研究 2 3 1,25-(OH) D 对 1 型糖尿病的防治作用及其机制研究 2 3 中文摘要 糖尿病危害严重，与肿瘤、心血管疾病合称为威胁人类健康的三大杀手。近 年来随着人类饮食结构的变化和人口的老龄化，世界糖尿病的发病率急剧升高。 我国由于肥胖人群的增加，糖尿病的发病更是直线攀升，已经超过印度成为全球 糖尿病患者最多的国家。维生素 D 具有多种效应，其在体内的活性代谢物 1,25-(OH) D 与靶细胞上的维生素D 受体 (vitamin D receptor,VDR) 结合后，可发 2 3 挥调节钙磷代谢、抗炎症、调控细胞有丝分裂、免疫调节和改善糖代谢等生物学 功能。国内外的多项流行病学调查表明，维生素D 可对糖尿病起到预防和治疗的 作用，但其作用机制尚不明确。 目的：评价VDR 基因敲除小鼠的生物学特性及其与糖尿病发生的关系；验证 维生素 D 的活性代谢物 1,25-(OH) D 对 1 型糖尿病小鼠的防治作用，并探索 2 3 1,25-(OH) D 对1 型糖尿病作用的分子机制，为糖尿病的防治和新药靶位的发现提 2 3 供理论和实验依据。 方法：8~10 周龄 VDR 基因敲除杂合子（VDR+/- ）小鼠雌雄合笼，PCR 法鉴 定子代小鼠基因型，记录VDR 基因敲除纯合子（VDR-/- ）、VDR+/-和野生型（VDR+/+ ） 数量，统计小鼠繁殖性能，绘制生长曲线；比较子代同窝VDR-/- 、VDR+/-和VDR+/+ 小鼠脏器的重量和组织学形态差异以及血液生理生化指标的变化；将 VDR-/-和 +/+ VDR 小鼠分别尾静脉注射四氧嘧啶，用药后监测血糖和尿糖一个月，统计糖尿 病的发生率；为研究1,25-(OH) D 对1 型糖尿病的预防作用，健康小鼠以2 µg/kg 2 3 隔日腹腔注射1,25-(OH) D 持续两周后，用小剂量链脲佐菌素（STZ ）连续多日注 2 3 射法建立C57BL/6J 小鼠1 型糖尿病模型，比较1,25-(OH) D 干预与否糖尿病的发 2 3 病率；分别用1,25-(OH) D 和雷帕霉素（RAPA ）处理糖尿病小鼠，监测小鼠血糖、 2 3 体重、进食量和饮水量，用病理切片和超薄切片观察小鼠脏器的病理变化以及凋 亡和自噬的发生，免疫组化法检测 VDR 以及自噬和凋亡相关蛋白 Beclin-1 、 Caspase-3 的表达量，流式细胞术测定脾脏Th1/Th2 分群和调节性T 细胞（Treg ） II 的数量；将具有胰岛β 细胞生理特性的小鼠胰岛素瘤细胞株 MIN6 培养至对数生 长期，研究1,25(OH) D 对STZ 所致细胞破坏的干预作用： ELISA 法测定细胞胰 2 3 岛素的分泌量，MTT 法测定细胞活力，流式细胞术测定细胞凋亡率，Western Blot 检测Beclin-1 和Bcl-2 蛋白的表达。 结果： +/- -/- 1. VDR 小鼠的平均妊娠期为22.5±1.78 天，后代中VDR 出现的几率仅为5% （8/165 ）；VDR-/- 小鼠的体重和主要脏器的重量与同窝野生型和杂合子无明显差 异，但其肝脏、肾脏和脾脏有炎