杂色蛤降血糖功能性产品分析开发.pdf

Thesis for the Degree of Master Research on α- glucosidase inhibiting product from Ruditapes philippinarum Dissertation Submitted to Dalian Ocean University By Jiang Wenjie Dissertation Supervisor: LiZhibo, Associate Professor June, 2015 摘 要 摘 要 本文以杂色蛤为研究对象，主要从杂色蛤α-葡萄糖苷酶抑制肽的制备工艺优化，酶解 用酶固定化工艺研究，杂色蛤降血糖多肽的纯化及微胶囊制备四个方面进行研究，主要结 果如下： 1、利用酶解法制备杂色蛤α-葡萄糖苷酶抑制肽，以水解度和α-葡萄糖苷酶抑制率为 指标，采用单因素和正交实验对酶解工艺进行优化，得到最佳工艺条件为：料液比（m/v ） 1:30，加酶量2.0% ，酶解时间 180min，酶解温度32℃，pH2.0 。在该条件下，胃蛋白酶 对杂色蛤有较好的酶解效果，验证实验结果表明，在上述最优条件下，杂色蛤酶解液的蛋 白水解度为17.4%；当酶解产物浓度为50mg/mL 时，对α-葡萄糖苷酶的抑制率为50.2% 。 2 、利用海藻酸钠-壳聚糖对胃蛋白酶进行固定化，以酶活回收率为指标，采用响应面 分析法进行固定化工艺优化，得到最佳工艺条件为：海藻酸钠浓度为 0.9%，游离酶稀释 倍数为10 倍，氯化钙浓度为3.6%，固定化时间为1.5h，在该条件下固定化酶的酶活回收 率为 73.42% 。用固定化胃蛋白酶酶解杂色蛤制备的多肽对 α-葡萄糖苷酶的抑制率为 54.07%，结果表明：固定化胃蛋白酶的酶解效率略高于游离酶。 3、以多肽对α-葡萄糖苷酶的抑制率为指标，采用DEAE-F.F 及Sephadex G-25 对杂 色蛤降血糖多肽进行分离纯化，得到具有较高抑制活性的组分G，并测定该组分的分子量 约为580Da 。 4 、利用海藻酸钠-壳聚糖对杂色蛤降血糖多肽进行包埋制备微胶囊，以包埋率为指 标，采用正交实验分析得到最优工艺为：海藻酸钠浓度为1%，海藻酸钠与降血糖肽的比 例为1：5，氯化钙浓度为5%，壳聚糖浓度2% 。在该条件下得到的包埋率：67.21%，有 效载物量：33.67% 。该工艺制备的微胶囊在模拟胃液中仅有极少量释放，在模拟肠液中 有良好的释放性能。制备的杂色蛤多肽微胶囊经过胶囊封装后得到降血糖功能性产品。 关键词：杂色蛤；α-葡萄糖苷酶抑制肽；固定化酶；分离纯化；微胶囊 I Abstract Abstract In this research, Ruditapes philippinarum was studied from hydrolysis conditions optimization, immobilized enzyme preparation, active peptides purification and microcapsule preparation, respectively. The main study results as follows: 1、The α-glucosidase inhibiting peptides were prepared from Ruditapes Philippinarum. The hydrolysis conditions were optimized