rhG-CSF动员对造血干细胞移植供者CD4%2bT细胞活化与LFA-1分子构象影响研究.pdfVIP

PLAG伽eml Hospital I PART of andIts with ICAM．1GFP Construction binding Molt．4Cellsl ICAM．1GFP蛋白在CHo细胞中的稳定表达及其与 Molt．4细胞的结合 中文摘要 研究背景：细胞问黏附分子1(IC舢Ⅵ．1)属于免疫球蛋白基因家族成员之一，作用于细胞 与细胞间的黏附，可表达于多种细胞表面，其配体是淋巴细胞功能相关抗原．1(LFA．1) 和巨噬细胞抗原复合体．1(Mac．1)，ICAM．1与其配体的相互作用，在白细胞选择性黏 附、游走、抗原递呈和效应T细胞行使功能中起重要作用；在炎症部位，ICAM-l 可增强表达于多谱系细胞表面，炎症细胞因子如TNF．Q、IFN．Y等可上调和诱导其 表达。研究IC舢Ⅵ．1在白细胞细胞的表达情况有助于揭示病程演进中的白细胞选择 性黏附分子机理，从不同的角度和层次揭示和阐明免疫细胞、血管内皮细胞和肿瘤 细胞等迁移过程中的一些重要分子机理，同时为分子靶治疗提供理论依据。 目的：构建人细胞间黏附分子l(IC朋Ⅵ．1)全长基因的真核表达载体pEGFP．C1． IC√蝴．1，并转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO．K1)细胞株。 方法：采用R■PcR法从健康人外周血中分离单个核细胞中钓取ICAM．1全长基因 III ICAM．1GFP／CHO细胞能连接PMA处理的Mon4细胞。 结果：重组质粒经限制性酶切鉴定得到与ICAM．1全长基因长度一致(1622bp)的酶切 产物；测序分析证实，PCR产物与G吼Balll【上登录的ICAM．1基因(NM000201) 序列完全一致，表明成功地完成了ICAM．1的扩增和表达载体的构建；荧光显微镜下 可见转染的CHO细胞有绿色荧光蛋白的表达，表达的融合蛋白较均匀的分布于整个 GFP 细胞，FACS检测ICAM．1GFP的荧光转染率为(13士5．5)％，表明IC剐M．1 基因进入到CHO细胞并获得了有效表达，成功构建了ICAM．1GFP／CHO细胞，并 且IC。气M—l GFP肥HO细胞能够连接PMA处理的Mol“细胞。 结论：本研究通过构建带有ICAM．1GFP功能基因增强型绿色荧光蛋白表达载体，构 建完成真核表达载体ICAM．1GFP基因在CHO细胞内成功表达，为进一步研究 ICAM．1分子的功能打下基础。 关键词：入细胞问黏附分子．1；增强型绿色荧光蛋白；基因克隆；序列分析；CHo 细胞株 1 This (No． Abstract humanintercellularadhesion Aim：1bclone molecule·l(ICf蝴一1) me Vector andto expressionICAM一1—QFP euI(a巧otic gene，cOnstmct cellsfor缸恤er me of ICAM—l—GFP／CHO Visualizingdyn锄ics generate ICAM．1 invasionand movement山lringleukocyte础lesion，tumor Methods：ICAM—lcDNAwas