子宫腺肌病ermir-21介导的rasraf通路作用机制及加味芍药甘草汤对其的干预.pdf

IMIIIIIIHIIII 摘 要 IIIIllllllllllliI 目的： 1．通过临床收集子宫腺肌病痛经患者子宫组织标本，观察子宫腺肌病在位内膜及 及Ras／Raf／P—C—Raf信号通路的蛋白表达；通过体外培养子宫腺肌病痛经患者病灶细 胞，检测雌激素激活及雌激素剥夺状态下细胞抑制率及miR一2l表达水平，探讨子宫 性，有望为未来研发防治子宫腺肌新药物提供实验依据和新的靶点。 2．通过体外培养子宫腺肌病痛经患者病灶细胞，探讨加味芍药甘草汤复方、含药 平的影响，拟从分子基因水平上阐明其治疗子宫腺肌病痛经的深层作用机理；通过药 效筛选确定其有效部位，为临床优化处方和辩证用药提供依据和实验基础。 方法： 宫切除子宫腺肌病痛经患者蜡块60例，取同期59例因宫颈病变(CIN)行全宫切除 患者蜡块作对照，采用免疫组织化学法检测子宫腺肌病痛经患者子宫在位内膜、异位 达水平及其相关性：收集2013年1月一2014年7月广州中医药大学第一附属医院妇科 住院要求手术治疗的子宫腺肌病痛经患者子宫组织，采用酶联免疫法、免疫蛋白印迹 表达水平，以同期因宫颈病变(CINIII)行全宫切除患者的子宫组织作为对照组；通 过体外培养子宫腺肌病痛经患者病灶细胞，采用CCK一8法和实时荧光定量(探针法) 检测雌激素激活状态及剥夺状态、阻断雌激素受体、抑制Ras表达后细胞抑制率及 miR-21表达水平。 2．采用免疫细胞化学法、酶联免疫法、实时荧光定量(探针法)、流式细胞技术、 CCK一8法观察加味芍芍药甘草汤、含药血清或其单体对体外培养子宫腺肌病痛经患者 R一2 病灶细胞mi 号通路因子(Ras、Raf)、细胞凋亡、细胞抑制的影响。以米非司酮组、不含血清培 养液及空白血清组作为对照组。 结果： 明显升高；子宫腺肌病异位病灶及在位内膜E2表达水平无明显差异；P450arom主要 表达在胞浆，子宫腺肌病在位内膜与异位病灶之间表达水平无明显差异(P)O．05)； ER主要表达在胞核，子宫腺肌病异位病灶ER表达水平较其在位内膜表达水平明显升 Raf表达水平较正常子宫肌层、在位内膜表达水平均明显升高，子宫腺肌病子宫组织 中Ras、Raf总体表达水平较正常子宫组织亦明显升高． 表达水平较异位病灶组及正常子宫内膜组高，差异有统计学意义(PO．05)；子宫腺 肌病异位病灶、正常子宫肌层、正常子宫内膜之间P—C—Raf表达水平无明显差异 (PO．05)；子宫腺肌病在位内膜组与正常子宫肌层组P—C—Raf表达水平无明显差异 (PO．05)。 灶细胞增殖，两组之间抑制率差异无统计学意义(PO．05)。雌激素剥夺组与雌激素 182780组细 剥夺+ICI182780组均能抑制子宫腺肌病病灶细胞增殖，雌激素剥夺+ICI 胞抑制率较雌激素剥夺组高，差异有统计学意义(PO．05)。雌激素激活状态能促进 子宫腺肌病病灶细胞增殖；E2(雌激素激活状态)组能明显提高子宫腺肌病病灶细 与雌激素剥夺组及对照组相比有统计学意义(P(O．05)， 4、加味芍药甘草汤、含药血清及其单体对人子宫腺肌病病灶细胞增殖抑制与凋 亡的影响：加味芍药甘草汤高低浓度组24h及48h、加味芍药甘草汤含药血清组、米 均能提高子宫腺肌病病灶细胞的凋亡率(PO．05)；除甘草苷高浓度组24h组、空白 血清组24h及48h外，其余各组均能明显抑制细胞增殖，其中加味芍药甘草汤高浓度 48h的细胞增殖抑制率及细胞凋亡率最高，除与加味芍药甘草汤高浓度24h相比无统 计意义外，均高于其他各组；加昧芍药甘草汤含药血清组24h对细胞凋亡率的影响优 于加味芍药甘草汤含药血清组48h及米非司酮组24h及48h，与加味芍药甘草汤高低 浓度组24h、加味芍药甘草汤低浓度组48h、芍药苷高浓度组24h、芍药苷甘草苷高浓 度组24h相持平；并发现米非司酮组24h对细胞凋亡率的影响明显高于芍药苷高低浓 度48h、甘草苷高低浓度48h、芍药苷甘草苷高低浓度48h；而加味芍药甘草汤含药血 清组、米非司酮组、芍药苷高低浓度组48h、芍药苷高浓度组24h、甘草苷低浓度组 48h、芍药苷甘草苷高浓度组48h对细胞增殖抑制率影响相一致。药物干预时间点为