损伤血瘀证微观胞凋亡、免疫机制和中医宏观思维诊断的比较研究.pdfVIP

前言 中医诊断学的深入研究是中医科学研究领域中的重点和难点。在教学、科研、 临床实践中，有很多的实质问题阻碍了中医诊断学的快速发展。例如，中医宏观 现象和西医微观指标是否一致，局部组织和整体系统存在怎样的关系，疾病或证 型的静态特征和动态特征有何联系。面对如此多的未知与疑惑，需要抽茧拨丝观 察这些问题的本质，也就是说，必须从某些诊断敏感性和特异性强的临床证型出 发，深入对比以上中医与西医相互联络的环节，使中医诊断学成为宏观与微观统 一，局部与整体统一，静态与动态统一的医学科学。 而损伤血瘀证是临床中常见的一种证型。这种直接损伤造成血瘀证，其模型 较为简单且单纯，诊断的特异性及敏感性都非常高，不同个体受到相同程度的损 伤后，其病理变化阶段也颇为一致，适用于研究中医诊断宏观与微观，局部与整 体，静态与动态的统一情况。因此本课题从损伤血瘀证入手研究中医诊断宏观与 微观比较的诸多问题。 中文摘要 目的： 本课题拟从细胞调亡、免疫细胞因子角度对损伤血瘀证进行研究，为今后临 床上从骨骼肌细胞调亡角度、免疫角度有效诊断损伤血瘀证不同病理周期及合理 把握用药时期提供实验室依据。通过本论文的探索及研究，不仅能为损伤血瘀证 的证候客观化作出重要的贡献，更加能补充说明中医证候学的科学内涵，即宏观 与微观的统一，局部与整体的统一，静态与动态的统一。 方法： SD 大鼠 80 只，按随机原则分为 8 组，即空白对照组、造模后 2h 组、造模 后 8h 组、造模后 24h 组、造模后 2d 组、造模后 3d 组、造模后 5d 组和造模后 7d 组，每组 10 只。造模方法采用成熟的定量重力打击法，空白对照组在造模前， 1 其余组分别在相应的时象点处死大鼠，并分离其骨骼肌细胞和血液，测试骨骼肌 细胞凋亡情况、病理切片及血液的免疫细胞因子指标 IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、 IL-10 和 TNF- α，动态观察损伤后骨骼肌细胞凋亡、组织病理状态、全身免疫变 化情况，通过损伤血瘀证早期的各种客观化的实验数据，判断损伤血瘀证早期的 证本质。同时结合中医诊断理论,通过对中西医的系统比较,探索中医诊断学宏观 与微观，局部与整体，静态与动态相统一的理论基础。 结果： 1.AP-TUNNEL 法测试推算出损伤早期（1 周以内）凋亡水平的基本规律。 2.流式细胞仪测 caspase-3 染色率与细胞凋亡水平具有高度的相关性。 3.细胞因子测定 IL-2 的变化趋势明确，形成一个先扬后抑的曲线；IL-4 在损伤后平稳上升，24H 后形成快速上升趋势，在 72H 形成一个高点，逐步回落， 并显著低于伤后 48 小时的水平；IL-6 的在损伤血瘀证模型成功之后持续上升， 在 72H 形成一个高点，逐步回落至损伤后 48H 的水平；IL-8 的在损伤血瘀证模 型成功之后持续上升，在 72H 形成一个高点，在伤后第 168 小时，即第 7 天形成 回落至损伤后48H 的水平；IL-10 的在损伤血瘀证模型成功之后持续上升，在 72H 形成一个高点，在伤后第 168 小时，即第 7 天形成回落至损伤后 48H 的水平；TNF- α的在损伤血瘀证模型成功之后持续上升，在48H 形成一个高点，在伤后第 72 小时，回落至后损伤后 24H 的水平，并且持续下降。 4 .HE 染色观察骨骼肌组织病理变化情况，可以初步判断损伤血瘀证早期（1 周）的病理分期：①出血期：0-24 小时;②炎性期：24-72 小时;③炎性及肉芽修 复期：72-168 小时 结论： 1.定量打击法造成的损伤血瘀证导致和加速细胞凋亡。 2.通过检测阳性率较高的凋亡调节蛋白酶caspase-3与凋亡有着必然的联 系。 2 3.通过观察细胞因子IL-2，IL-4，IL-6，IL-8，IL-10，TNF- α，发现损伤 血瘀证凋亡变化趋势与机体免疫细胞因子之间存在着双向动态平衡的偶联关系。 4.通过镜下HE染色，进一步证实出血、免疫反应、凋亡、修复之间具有确切 的周期性联动关系。 5.从临床意义分析，伤科一周左右的水肿是可能免疫系统性反应降低导致的 细胞凋亡产生的。 6.