琼玉膏对衰老大下丘脑的影响及候选靶蛋白研究.pdf

摘 要 目的： 采用D．半乳糖致亚急性衰老大鼠模型，用琼玉膏干预，取下丘脑作为研究部位， 用蛋白质组学中的同位素相对标记与绝对定量(iTRAQ)技术，探索琼玉膏对衰老大 鼠产生调节作用的相关蛋白质，对这些蛋白质进行生物信息学分析，进一步确定琼玉 膏对衰老大鼠下丘脑作用的候选靶蛋白，从而在分子水平上探索琼玉膏的作用机制， 为进一步研究琼玉膏药物作用靶点和干预提供实验基础，并对琼玉膏制剂的开发利用 提供理论依据。 方法： 将42只6月龄SD雄性大鼠随机分为3组，每组14只，分笼饲养每笼七只，标 记为琼玉膏组、空白组和模型组。模型组每天以D．半乳糖按300 mg／(kg·d)进行腹腔 注射，制造亚急性衰老模型，琼玉膏组与模型组相同，即从实验第一天开始，以D． 半乳糖按300 mg／(kg·d)进行腹腔注射，空白对照组则相同方法和剂量给予生理盐水； 同时琼玉膏组每天给予灌胃琼玉膏0．583 ml／(1009·d)，模型组和空白对照组则给 予灌胃生理盐水0．583 ml／(1009·d)，连续用药40天。停药后取血清和肝脏，进行 抗氧化能力测试评价造模情况。 同时提取大鼠下丘脑全蛋白，利用iTRAQ技术，通过蛋白质酶解、肽段标记、 高pH反向液相色谱分离、质谱检测等方法，确定显著差异蛋白。结合基因本体论注 释(Gene 异蛋白的功能和属性、代谢通路和互作网络进行分析研究，最终确定与琼玉膏作用相 关的候选靶蛋白。 结果： 1．成功建立亚急性衰老大鼠模型，模型组大鼠肝脏中SOD活力、血清中GSH．Px 活力值较空白组显著降低，结果具有统计学意义。 2．琼玉膏组与模型组比较，大鼠肝脏中SOD活力、血清中的GSH—Px活力值升高， 结果具有统计学意义。 3．经过蛋白质组学中iTRAQ技术的处理，分析比较三组中表达量发生变化的蛋 白，发现14种显著差异蛋白质。 这些蛋白有，细胞色素c氧化酶多肽VIc．2、中性神经酰胺酶、植烷酸．辅酶A羟 化酶相互作用类蛋白、尼克酰胺磷酸核糖转移酶、尾锚定蛋白插入受体WRB、O一甘 露糖13—1,4．N．乙酰葡糖胺基转移酶、信号转导子和转录激活子5b、脂酰CoA合成酶、 特定微管伴侣蛋白IE、3．磷酸肌醇依赖的蛋白激酶1、双特异性作用蛋白激酶7、R．AS 脒基释放蛋白2、SHC转运蛋白和泛酸酯激酶4，琼玉膏对这些蛋白均起到下调的作 用。 4．生物信息学分析，GO注释中差异蛋白的功能共有31种，包括生物过程15种、 e 细胞构成9种、分子功能7种：KEGG分析发现主要代谢通路有5条，分别为Fc RI信号通路、泛酸和辅酶A的生物合成、T细胞受体信号通路、ErbB受体信号通路 以及鞘脂类代谢。 结论： 14种显著差异蛋白包括线粒体相关蛋白、代谢相关蛋白、生长分化相关蛋白、连 接相关蛋白、催化相关的蛋白和信号传导相关蛋白。经过生物信息学分析，琼玉膏作 用的靶蛋白可能在中性神经酰胺酶蛋白、植烷酸一辅酶A羟化酶相互作用类蛋白、RAS 脒基释放蛋白2、SHC转运蛋白、双重特异性蛋白激酶7以及信号转导子和转录激活 表达的蛋白有成为琼玉膏延缓衰老作用靶标的可能，有待进一步深入研究。 关键词： 琼玉膏；延缓衰老；下丘脑：蛋白质组学；生物信息学 and I amusi n i rats I onthe agng Qi i nfuence hypotha ongyugao candi date i n screeni ngfor targetprote neseMediCine