皂荚提取物对肝细胞小鼠tgf-βsmads信号系统调控的影响.pdf

中文摘要 目的：全世界平均每年约有100万人死于肝癌。近年来，研究肿瘤细胞中 信号转导通路的作用成为阐明肿瘤发生发展机制和寻找有效生物学治疗 手段的热点。研究表明TGF-D／Smads信号异常的传导是肿瘤浸润和转移 的重要因素。中医认为肿瘤的形成病机很复杂，认为痰浊内阻是肿瘤形成 的病机关键。著名医学家朱丹溪在他的主要著作都列有痰门，探讨其理法 方药，尤其在肿瘤的发病因素的认识上提出与痰有关。皂荚是具有“祛痰 化湿、散结消肿 功效的抗肿瘤的常用中药。我们希望通过研究皂荚提 响，为皂荚提取物(乙酸乙酯提取)是否具有抗肝癌的作用提供参考。 方法： 第一部分：理论探讨 1从中医理论上阐明痰和肿瘤的关系。强调痰、毒和瘀相互影响、相 互转化、相互胶着是肿瘤发生和发展的关键。 2提出从“痰”论治肝癌的可行性。并阐明化痰药“皂荚具有抗癌 作用的前期研究依据。 第二部分：皂荚的文献研究 从皂荚的一般特性研究；皂荚的历史研究探讨；含有皂荚的方剂研 究；皂荚的药理学研究和皂荚的临床应用等方面阐明皂荚的特点和研究 价值。 第三部分：实验研究 我们采用清洁级的昆明种小鼠60只。通过随机方法(随机数字表法) 将实验动物分为6组，实验分为阴性对照组(吐温80溶剂)；皂荚提取 对照组(金龙胶囊组)；空白对照组(不造模组)。每组1o只小鼠。造模 采用小鼠右腋皮下接种H22肝癌细胞悬液的方法。造模后第2天到第16 天，按实验分组和要求(每只灌胃量为o．4ml，已经配好浓度)进行灌胃。 造模后第17天处死小鼠，收集标本进行各项检查。实验一：观察各组小 鼠大体情况；各组小鼠死亡率；各组小鼠剥瘤称重，计算各组肿瘤抑制率 和病理学观察。实验--：检测各组小鼠血清中的Y一谷氨酰转移酶(GGT)， 实验三：实时荧光定量的方法检测各组小鼠肝脏组织中的Smad4mRNh和 的表达。 结果： 实验一：皂荚提取物对接种H22肝癌细胞荷瘤小鼠一般生物学特性和病 理学的观察 1鼠大体观察：空白对照组小鼠活动正常，精神状态很好，毛发正常， 并且有光泽，饮食正常，大小便正常。皂荚提取物(高剂量组)，皂荚提 取物(中剂量组)，皂荚提取物(低剂量组)和阳性对照组(金龙胶囊组)， 各组小鼠毛发脱落、有稀疏感、光泽度欠佳，精神不振，活动明显减少， 饮食较空白对照组明显减少，饮水少较空白对照组明显减少不明显，大小 便情况较空白对照组少，对外界反应慢。阴性对照组(溶剂土温8o)的 情况类似。右侧前肢接种H22肝癌细胞的小鼠，接种部位可见大小不等的 肿块。有部分小鼠腹腔部位出现腹部胀大，用指尖触诊，有明显波动感， 考虑为形成的腹水。 2昆明种小鼠的死亡率达21．67％。 3各组小鼠肿瘤重量比较：皂荚提取物(高)平均肿瘤重量2．87土 平均肿瘤重量3．64±0．36，阳性对照组平均肿瘤重量2．60±0．36与阴性 3±O．4 对照组平均肿瘤重量4．7 o比较明显降低，P0．01；阴性对照组， 皂荚提取物(中)，皂荚提取物(低)与阳性对照组比较明显增高，Po．01； 皂荚提取物(高)与阳性对照组比较肿瘤重量无统计学差异，P0．05。 各组小鼠肿瘤抑制率：阳性对照组为45％；阴性对照组为0；皂荚提 取物高剂量组39％；皂荚提取物中剂量组22％；皂荚提取物低剂量组为 Ⅱ 23％。 4病理学观察：空白对照组小鼠肝脏的肉眼和显微镜下观察都表现正 常，模型组各组小鼠总体上较空白对照组(非模型组)有更多的不正常的 表现。 阴性对照组，皂荚提取物中剂量组和皂荚提取物低剂量组病理学观 察：肉眼大体观察：小鼠的肝脏体积较空白对照组小鼠明显增大；质地较 空白对照组硬度增强；肝脏表面可见多个散在的灰白结节。阴性对照组最 多，皂荚提取物中剂量组和皂荚提取物低剂量组比阴性对照组略少。光学 显微镜下：肝小叶结构不清晰，肝细胞索排列不整齐。细胞核形态明显异 常，肝细胞有部分细胞核增大，或核质比例增大。 阳性对照组，皂荚提取物高剂量组病理学观察：肉眼大体观察：小鼠 的肝脏体积较空白对照组小鼠略有增大；质地较空白对照组硬度略有增 强，但不及阴性对照组；肝脏表面可以偶见散在的灰白结节。阳性对照组 和皂荚提取物高剂量组没有明显差别。光学显微镜下：肝小叶结构欠清晰， 肝细胞索排列不整齐。细胞核形态异常不