益肾续经汤延缓经过渡期大鼠卵巢功能衰老的实验研究.pdfVIP

中文摘要 研究目的探讨女性绝经过渡期早期的衰老机理，在前期临床研 究的基础上，通过建立绝经过渡期早期动物模型，从内分泌调控及 Caspase依赖型卵巢凋亡通路两个方面，探讨益肾续经汤在绝经过渡 期早期延缓卵巢衰老进程的作用机制。 理论研究绝经过渡期早期标志女性开始衰老，肝血不足是女性 衰老早期的典型特点；衰老速度与肾气的强弱密切相关；瘀血是衰老 过程的必然产物，血瘀是加速衰老的重要因素。黎烈荣教授针对绝经 过渡期早期女性特殊的生理病理基础，兼顾开始虚损的肝肾二脏，养 肝血、补肾精的同时，不忘通血脉，以免瘀血阻滞脉络而加速衰老进 程，体现了“既病防变”的治未病思想。从女性的最早期衰老阶段着 手，在治疗绝经过渡期早期月经不调的同时，中药干预可延缓女性衰 老进程，以期推迟绝经年龄，减少绝经过渡期晚期围绝经期综合征的 发生，这正是“未病先防力的具体体现。 实验研究 Transition，MT) 研究方法：本实验以绝经过渡期(Menopausal wistar雌性大鼠为研究对象，选取阴道脱落细胞涂片表现为动情间 期延长、动情周期紊乱者纳入实验。以大鼠月龄区分MT早期(10月 龄)和MT晚期(11～12月龄)。选取符合MT早期标准的大鼠24只， 随机分为MT早期模型组、MT早期治疗组和西药对照组，每组8只； 选取符合MT晚期标准的大鼠16只，随机分为MT晚期模型组、MT晚 期治疗组，每组8只；另选取4～6月龄大鼠8只，作为青年对照组 (青年组)。MT早期模型组、MT晚期模型组、青年组分别给予生理盐 水；MT早期治疗组和MT晚期治疗组给予益肾续经汤；西药组予以去 氧孕烯炔雌醇水溶液灌胃。各组每日均按lml／lOOg灌胃，连续灌胃 15天，末次给药24小时后，腹主动脉取血，分离血清，酶联免疫吸 摘取卵巢，以电子天平称取卵巢湿重，将脏器湿重换算成脏器指数。 石蜡包埋，常规切片4um，左侧卵巢切片HE染色用于光镜下观察卵 巢形态学表现，免疫组化SP法测定各组大鼠右侧卵巢Fas、Cytc、 Caspasc一12、Caspase一3的表达。 实验结果： 水平差异无显著性(P0．05)。 著性(P0．05) 型组显著低于青年组(P0．01)。使用益肾续经汤后，MT早期治疗组 晚期模型组(P0．01)。 早期模型组(Po．05)。MT晚期治疗组卵巢指数虽略高于MT晚期模 型组，但差异无显著意义(Po．05)。西药组与MT早期模型组差异无 显著性(P0．05)。 5、光镜下可见，MT早期治疗组和青年组大鼠卵巢内有较多数日 的初级卵泡、次级卵泡、窦状卵泡等各级生长发育卵泡，黄体、白体 等都可见，卵泡形状规则，体积较大。M，I．早期模型组和西药组大鼠 卵巢皮质内卵泡数目较少，卵泡形状不规则。MT晚期模型组和MT晚 期治疗组大鼠卵巢内生长卵泡明显减少，卵泡结构紊乱。 6、MT晚期模型组卵巢Fas表达水平显著高于MT早期模型组 经汤后，MT早期治疗组较MT早期模型组卵巢Fas表达水平显著降低 西药组卵巢Fas表达水平与MT早期模型组差异无显著意义(P0．05)。 与青年组水平接近(P0．05)。M-I．晚期治疗组亦可降低卵巢 著意义(P0．05)。 期模型组，差异无显著性(P0．05)。 9、未给药组全部大鼠卵巢Caspase-3表达与其他凋亡指标的两 因素相关分析显示，Caspase-3与Fas(r=O．453，P0．001)、 显著正相关。 结论：导师黎烈荣教授提出在绝经过渡期早期以养肝血、补肾精、 通血脉立论，拟定益肾续经汤治疗绝经过渡期早期月经不调，延缓女 性衰老进程。本课题在前期临床研究疗效确切的基础上，首次建立绝 经过渡期早期模型，为研究者未来从实验角度研究绝经过渡期提供了 研究基础。实验研究表明，在MT早期使用益肾续经汤，能够升高INHB 水平，增强INHB对FSH的负反馈调节，从而降低FSH水平，可以调 节卵泡发育和闭锁交替引起的雌激素波动至正常状态。益肾续经汤通 过调整紊乱的激素水平，改善激素效应，使激素作用的靶器官蛋白质 III 合成增加，降低卵巢重量下降速度，对生殖轴具有正向调节作用。益 肾续经汤能通过降低三条经典凋亡途径的启动凋亡因子Fas、CytC、 Caspase-12的表达，从多靶点降低凋