电针对老年性痴大鼠学习记忆相关信号通路影响的研究.pdfVIP

中文摘要 目的：老年性痴呆，又称阿尔茨海默病(AD)，是发生于老年 前期或老年期，以进行性记忆等认知障碍为主要症状，同时伴有精神 行为异常的神经退行性疾病。其特征性临床表现为严重的学习记忆功 能下降、分析判断能力衰退、情绪改变、行为失常、甚至意识模糊， 严重影响了老年人的日常生活和社会活动能力，使其生命质量下降。 世界人口正在加速变老。第五次人口普查表明，我国己经成为老龄国 家。到本世纪中叶，我国60岁以上老年人将达4亿左右，届时每4 个人中就有1个老年人。为此，包括我国在内的各国政府均加快了防 治老年性痴呆的研究工作。而有效改善AD患者的学习记忆能力，提 高其生存质量，是AD研究的重点和突破口所在。 AD的发病机制复杂，许多信号分子在其中发挥重要作用，多个 信号通路参与此过程，而临床上现有的针对AD发病的单基因或单靶 向治疗药物并不能有效改善或控制患者症状，疗效短暂而局限，且副 作用明显。针对单靶向药物对抗复杂疾病的缺点，近年来科学研究者 提出并尝试将多靶向治疗策略应用于AD治疗。这是因为复杂疾病的 发病往往由多种信号通路参与，而单靶向药物作用忽视了细胞内生物 大分子之间的相互影响及信号通路中构成的网络系统的相互联系。并 且有研究者认为，保护细胞膜和细胞内各种信号转导途径免受Ap等 的伤害，有可能成为改善AD患者认知功能和防治AD的突破。 针灸以其疗效确切、作用持久、无副作用而受到医学界的普遍关 注。近年来，针灸疗法在防治AD方面的临床和实验研究取得很大进 展，对比发现针刺疗效不亚于中西药物，甚至在某些方面有优于西药 的趋势。同时，针灸疗法所具有的多靶点、多途径、多层次整体治疗 优势，也正符合现代医学针对复杂疾病提出的多靶向治疗策略。因此， 深入研究针灸对AD的干预作用，对进一步理解衰老和针刺机制，推 动临床研究具有重要意义。 为此，本实验从学习记忆的相关中枢信号通路入手，进一步探讨 针刺治疗AD的作用机制，为AD的针灸临床提供一定的实验依据。 方法：将SD大鼠按随机数字表分为4组，即正常组、假手术组、 模型组、电针组。采用双侧海马一次性注射聚集态Ap25琊制备AD大 鼠模型，电针组选取双侧“肾俞穴、双侧“内关穴和“大椎’’穴，接 每天1次，每周6次，共治疗2周。采用Morris水迷宫检测各组大 鼠学习记忆能力的变化；采用HE染色，光镜下观察各组大鼠海马形 态学的变化；采用分光光度法检测各组大鼠Glu的变化；采用放射免 疫法检测各组大鼠海马c脚的变化；采用免疫组化法检测各组大鼠 海马PKA、CREB蛋白表达的变化；采用原位杂交法检测各组大鼠海 马№仍ARl训[ⅢA的变化。并进一步分析电针干预对上述各项指标 的影响。 结果：①定位航行实验中，假手术组与正常组相比，无明显差异 (P0．05)；与假手术组比较，模型组大鼠的逃避潜伏期明显延长， 差异有显著性(P0．01)；与模型组相比，电针组大鼠的学习记忆能 力有明显的提高(P0．05)。②空间探索实验中，假手术组与正常组 相比，无明显差异(P0．05)；与假手术组比较，模型组大鼠跨越平 台的次数减少，差异有显著性(P0．01)；与模型组相比，电针组大 鼠记忆平台的能力有明显提高(P0．05)。③HE染色：光镜下观察可 见正常组和假手术组大鼠海马各区神经元染色清晰，呈圆形、椭圆形 或锥形，排列整齐紧密。核呈圆形，大而清晰，核仁明显，形态完整。 模型组大鼠海马注射针道附近可见细胞增生、聚集，核小深染，可能 为胶质细胞；CAl区、CA3区锥体细胞数量较假手术组明显减少，局 部神经元缺失，残留的神经元排列松散不规则，多数细胞胞核固缩， 核仁欠清晰，整个细胞深染成红色，部分呈现出多齿形、月牙型等凋 亡形态，并伴有胶质细胞增多。电针组能明显改善上述神经元损伤， 使海马神经细胞排列较整齐，核固缩现象改善。④分光光度法检测结 果显示：模型组大鼠海马Glu含量明显高于假手术组，差异有显著性 (P0．01)；与模型组相比，电针组大鼠海马Glu含量有明显的下降 Ⅱ (P0．05)。⑤放射免疫法检测结果显示：模型组大鼠海马cA．MP的 含量明显降低，与假手术组比较有显著性差异(P0．01)；电针组大 鼠海马cAMP含量与模型组比较有显著提高(P0．05)。⑥免疫组化 法检测结果显示：模型组大鼠海马CAl、CA3区PKA的表达明显低 于假手术组，差异有显著性(P0．01