循环肿瘤细胞(CTC)检测在肺癌中的应用资料.ppt

Baseline blood CAC 肿瘤细胞 a, monosomy 6p11-q12; b, amplification EGFR, c-MYC; EGFR (red) 5.p15.3 (green), 6p11-q12 (aqua), c-MYC (yellow). c, trisomy CEP3 and monosomy CEP17; d, polysomy CEP3, CEP7, CEP17 and 9p21.3. CEP3 (red), CEP7 (green), CEP17 (aqua), 9p21.3 (yellow). 外周循环肿瘤细胞的异常情况与手术切除的肿瘤细胞具有高度一致性。 Baseline blood CTC 肿瘤细胞 CTC中的染色体异常分子标记物与疾病的复发和生存密切相关 CTC计数 CTC的分子特性 指示预后 辅助检测抗癌药物的反应——作为预测和/或药物动力学生物标志物 联合已知的分期因素，获取更精确的预后 判断病人是否需要辅助化疗 检测癌症复发 辅助诊断 实时活检——肿瘤的生物学行为 阐明预后和预计的分子学特征 检测抗药情况——基于获得连续样本的便利性 提高对生物过程机制的了解 发现并鉴定新治疗靶点 CTC的应用：从细胞计数到分子特性 FISH分析CTC生物学特性 白细胞有两份CEP7（绿色），EGFR（红色）和MET (蓝色) CTC中， EGFR （红色）和MET (蓝色)基因扩增 微列阵 实时定量RT-PCR 对CTC进行基因表达分析 BIOTECAN宝藤——JJ强生 国内首个CELLSEARCH商业实验室 CH商业实验室 CTC检测样本准备： 使用CellSave储存管采集静脉血液标本10ml 轻轻颠倒8次，防止凝块 样本室温条件(15-30摄氏度)下96小时之内接受处理 接受阿霉素治疗的患者给药之后，至少需要等待7天 样本溶血及结块不能用于CTC检测！ 样本处理流程： 7.5ml血液采集于CellSave储存管，加入6.5ml缓冲液 离心 CellTracks?AutoPrep?系统自动处理流程 系统自动将被捕获的、经过染色的细胞置入MagNest装置的样本盒中 系统自动分析后得到结果并由操作人员进行最终判读 分析结果并出具报告单 若患者血液样本中CTC细胞≤cut off值，我们将附上CTC细胞图 ； 若患者血液样本中CTC细胞≥cut off值，我们只截取其中五个CTC细胞图作为代表 。 每周二、周五开始检测，报告将于检测后3个工作日内发送。 请注意采血时注意样本保质期（96h），选择合适的采血时间。 90%的癌症死于血行转移。 Notes are for internal training use only * 离心后，各个成分被分层分离，由下至上依次是红细胞、中性粒细胞、密度梯度液和单个核细胞（包括淋巴细胞、单核细胞、上皮细胞和肿瘤细胞），最上层是血浆。由于肿瘤细胞可能会移入血浆组分，而且如果不能立即离心会影响各类细胞的分层效果。 （ｉｓｏｌａｔｉｏｎｂｙｓｉｚｅｏｆｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ，ＩＳＥＴ) ８μｍ孔径的聚碳酸酯膜可使较小的淋巴细胞和中性粒细胞通过，而较大的肿瘤细胞则被阻滞在膜上 Notes are for internal training use only * Notes are for internal training use only * Ig 超家族的成员CD56, 又称神经细胞粘附因子( neural cellular adhension molecule, NCAM) , 嗜同种粘附, 表达于NK 细胞和一种T 细胞亚群细胞表面 * 荧光原位杂交技术（fluorescent in situ hybridiaation,FISH）创建于1986年。1969年Gall和Pardue首先应用核素标记核苷酸制备探针，通过放射自显影检测杂交信号。应用核素标记的探针其敏感性可以检测到中期染色体上几百个碱基的单拷贝靶核苷酸序列，敏感性虽高，但定位不够精确。FISH具有探针稳定、操作安全，可快速、多色显示多个不同探针的杂交信号等优点。FISH的灵敏感与探针标记方法和检测仪器性能有关，探针标记时掺入的修饰核苷酸比例直接影响杂交信号强度。FISH探针一般采用随机引物法或切口翻译法，如将PCR技术引入FISH探针标记，可使其灵敏度提高到0.25kb。应用慢扫描CCD配合影像处理理软件，增强信噪比，有利于检测微弱信号，如应用TSA系统（tyramide signal amplification）能将杂交信号再放大1000倍，可用于单拷贝基因的定位。FISH分辨率大约为1-3Mb,如果应用强变性剂处理染色体，让DN