琼脂糖电泳实验.ppt

* 琼脂糖凝胶电泳  * 一、实验目的： 1、掌握琼脂糖凝胶电泳的基本原理。 2、了解琼脂糖凝胶电泳的操作步骤和影响因素。 * 二、实验原理： 琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。其结构单元是 D-半乳糖和3.6-脱水-L-半乳糖。许多琼脂糖链依氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。其本身不带有电荷。因此该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、鉴定及纯化。 * DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。 DNA 分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。凝胶电泳不仅可分离不同相对分子质量的DNA ，也可以分离相对分子质量相同，但构型不同的DNA 分子。 溴化乙锭EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其荧光强度与DNA的含量成正比。 * 琼脂糖浓度(%) 线型DNA分子的分离范围(Kb) 0.3 5～60 0.6 1～20 0.7 0.8～10 0.9 0.5～7 1.2 0.9～6 1.5 0.2～3 12.0 0.1～2 琼脂糖凝胶的浓度与DNA分离范围 结论：琼脂糖浓度越大，孔隙越小，电泳速度越慢 * 　 三、实验材料 1.