zijiRECQ5beta; 解旋酶DNA 退火特性的动力学研究.pdfVIP

2012 年 第 57 卷 第 8 期：618 ~ 625 《中国科学》杂志社 论 文 SCIENCE CHINA PRESS zijiRECQ5β解旋酶DNA 退火特性的动力学研究 ①② ② ② ② ①③ ②* 丁秀艳 , 徐雅楠 , 李伟 , 王鹏业 , 奚绪光 , 窦硕星 ① 西北农林科技大学生命科学学院, 杨凌 712100; ② 中国科学院物理研究所软物质物理实验室, 北京凝聚态物理国家实验室, 北京 100190; ③ Institut Curie-Section de Recherche, Centre Universitaire, Bâtiment 110, F-91405 Orsay, France * 联系人, E-mail: sxdou@ 2011-06-02 收稿, 2011-11-11 接受 国家自然科学基金重点项目和国家重点基础研究发展计划(2009CB930704)资助 摘要 RecQ 家族解旋酶对维持基因组完整性起着关键作用. 许多 RecQ 家族解旋酶不仅可以 关键词 打开双链及其他更复杂的 DNA 结构, 而且有意思的是, 还具有 DNA 退火活性. 本文通过对 解旋酶 DNA 退火动力学、平衡态下DNA 结合以及与单链DNA 解离动力学的一系列测量, 系统研究 RECQ5β DNA 退火 了RECQ5β的DNA 退火特性. 结果显示, 在本研究的反应缓冲液条件下, 在没有或存在不同的 动力学 磷酸核苷因子(AMPPNP, ATPS 或ADP) 的情况下, 当酶分子覆盖约40%~50% DNA 单链时, DNA 结合 RECQ5β催化的DNA 退火效率最高. 通过对RECQ5β1~662 的比较研究证实, RECQ5β的C 末端 区域对该酶高的DNA 退火活性是必不可少的. 本文结果将有助于更好地理解RecQ 家族解旋 酶催化DNA 退火的机理. RecQ 家族解旋酶在基因组的稳定性维持方面发 末端区域. 该C-末端区域与其他RecQ 家族解旋酶没 挥重要作用[1,2]. 人体细胞内存在 5 种 RecQ 解旋酶, 有同源性. 以前的生物化学研究表明, RECQ5β 不仅 即RECQ1[3,4], BLM[5], WRN[6], RECQ4[7] 和RECQ5[8]. 具有DNA 解旋活性, 其C-末端区域还可以介导互补 其中, BLM, WRN 和RECQ4 的功能缺失会导致严重 单链DNA 退火[11]; 并且, RECQ5β的退火活性可能被 的人类遗传性疾病, 如 Bloom 综合征、Werner 综合 ATP 不水解类似物——ATPS 抑制, 但是其机理并 [11] 征和Rothmund-Thomson 综合征, 患者表现为基因组 不清楚 . RECQ5β 的退火活性可能还受到ADP 部 不稳定性和肿瘤易患性[9]. 分抑制的影响[15]. 目前, 关于 RECQ5β 和其他 RecQ 越来越多的研究表明, RecQ 家族解旋酶不仅可 家族解旋酶DNA 退火活性的分子机制还不清楚. 以解旋双链DNA 及其他更复杂的DNA 结构,