WU多瘤病毒筛查、基因克隆和蛋白表达.pdfVIP

WU多瘤病毒的筛查、基因克隆和蛋白的表达 中 文摘 要 WU多瘤病毒(WU 多瘤病毒，目前其临床意义上不明确。为了解WUPyV在深圳和汕头地区的感染 情况，以及WUPyV的分子生物学特征，为该病毒的致病性、诊断等研究提供科 学依据。本论文建立了WUPyV的筛查技术，对wUPyV基因进行了克隆及核酸 序列测定，在此基础上原核表达了结构蛋白VPl、VP2、VP3和非结构蛋白STAg (Small TumorAntigen)，并进行了初步抗原性分析。 核酸阳性，均为4岁以下患儿，男女比例11：6。17例WUPyV阳性病人的主要 临床症状表现为咳嗽、发热、喘息等典型的呼吸道感染症状。临床诊断为支气 管肺炎(10例)、喘肺(3例)、毛细支气管炎(2例)，上呼吸道感染(1例)， 疱疹性咽峡炎(1例)。所有、舢PyV阳性病例中与其他病毒合并感染的有7例， 根据参考文献及GenBank中已知的全基因序列设计5对引物，以wUPyV 5个片段，将它们分别连入具有氨苄青霉素抗性基因的pBM．TEasy载体，转化 大肠杆菌ToPl0，经筛选培养基培养，提取质粒，PCR鉴定之后，测序，通过 (accession 序列进行核酸序列比较分析发现，毒株之间基因同源性均在98％以上，为高度保 守病毒，基因突变在0％．1．5％，突变位点主要发生在非编码区和VPl编码区， 而VP2和STAg编码区的突变相对较少。 根据WUPyV全基因序列的测序结果，设计引物，以WUPyV阳性病例的总 核酸为模板，扩增出VPl、VP2、VP3及STAg的全基因片段，经限制性内切酶 3 肋肌HI和勋口，消化后，连入融合表达载体PGEX．20T，转化大肠杆菌 49000，与理论值相符。SDS．PAGE后切下目的条带，用水将凝胶内的目的蛋白 浸出，然后进行血清免疫印迹，结果显示所表达的融合蛋白能识别抗VPl、VP2、 VP3的抗体，表明所表达的蛋白具有抗原性。为进一步研究wUPyV的检测和致 病性研究奠定了良好基础。 关键词：wU多瘤病毒；筛查；克隆；测序；表达； 抗血清 4 and ofWU PolyomaVirus Screening，CloningExpression Abstract inrencent1jromthe with WU identified yeafs patient polyomaVims(WUPyV)、Ⅳas undermined．To acutue itsclinical remajns significance respiratoD，infection，and inSheIlzhen characteristicsa11dthemolecularcharacterization determinetheclinical bef打ourabletounderstand afld of will Shantou，Guangdong，ChimWUPyV，which dianosisof the the andclincal WUPyV，weinVestigaItedscre