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左金丸对应激性溃疡中枢调节的实验研究 硕士研究生：张红梅 指导老师：刘晓伟 摘要 课题背景： 应激性溃疡(SU)是临床常见的应激性疾病，是应激状态下一种以胃粘膜糜烂 或浅表性溃疡为特征的急性病变，重者可发生消化道出血、穿孔，出血后病死率高， 严重危害人类健康，}j前治疗尚缺乏有效措施。近来研究表明胃酸并非导致应激性 溃疡发生的关键因素，其发病尚与神经一内分泌一免疫系统功能密切相关；因此对高 危人群的防治应在制酸的同时，采用综合治疗手段，可有效降低应激性溃疡的发生 率及出血率。应激性溃疡的发病机制及防治方法虽已引起众多学者的重视，但目前 研究多限于胃粘膜局部神经．体液调节，对其发病的深层机制，如应激系统的启动因 素和中枢调节机制、神经一内分泌一免疫网络系统的调节作用等，尚缺乏研究。 中医药对应激性溃疡的辨证与治法具有整体调节的特色，并取得良好疗效，临 床报道有效率及治愈率均较高，应用己越来越广泛。特别是在降低应激反应强度、 预防出血、提高机体免疫力等方面具有很大优势，充分显示出中医药治疗应激性溃 疡的研究价值和广阔前景。本课题采用改良束缚浸水技术制作应激性溃疡模型，免 疫组化方法检测下丘脑室旁核c．10s，原位杂交法检测下丘脑室旁核CRHmRNA， 指标。旨在研究应激性溃疡中枢调节的分子机制和左金丸不同剂量对其干预作用， 从而揭示其临床疗效的深层机理。 实验方法： 替丁、D)，每组6只大鼠。左金丸高、中、低剂量组和西药对照组每次灌胃药物 2ml，正常对照组、模型组灌胃生理盐水2ml；每天1次，连续给药3天，第3天给 药2h后制作模型。造模参照束缚浸水法并加以改良，将大鼠放入自制大鼠固定器 (350ml塑料矿泉水瓶，去瓶盖、底)；调整使其不能产生强烈反抗，封上瓶底；浸 入温度约26。C的水中，水面达剑突处，6h后取出麻醉。取出鼠胃，测定胃液PH值 及溃疡指数，溃疡指数参照Guth法测量。腹主动脉取血；先后进行生理盐水、10 ％中性福尔马林溶液全身灌注；取脑，石蜡包埋，切片。常规HE染色观察胃溃疡 形态；免疫组化方法检测下丘脑室旁核c—fos；原位杂交法检测下丘脑室旁核 CRHmRNA：放射免疫方法检测血浆CORT和ACTH。 丰要结果： 一、左金丸对应激性溃疡大鼠胃粘膜的影响 (一)胃粘膜溃疡指数 模型组大鼠胃粘膜溃疡指数明显高于正常对照组 关系，其中尤以高剂量组的疗效为佳，接近正常组水平(Po．05)；雷尼替丁组与模 型组比较有显著性差异(P0．01)。左金丸高剂量组与雷尼替J-N比较，无显著性差 异(P0．05)。 (二)胃液PH值的变化模型组大鼠胃液PH值明显高于正常组(P0．01)。 左金丸各剂量组均可抑制胃酸分泌(P0．05)，但未呈剂量依赖性，其中高剂量组的 疗效为佳，接近正常组水平(P0．05)。雷尼替丁组与模型组比较有显著性差异 (PO．01)。左金丸高剂量组与雷尼替丁组比较，无显著性差异(PO．05)。 (三)大体标本观察 正常对照组大鼠胃粘膜光整完好，无充血、水肿、糜 烂等。应激性溃疡模型组大鼠胃粘膜浆膜层充血水肿，表面可见少量淡咖啡色物质， 粘膜充血、水肿、糜烂，多处点状或线状出血点和溃疡。左金丸高剂量组大鼠胃粘 膜表面光滑，轻度瘀血，仅见散在少量点状出血点，未见其他改变；中剂量组大鼠 胃粘膜瘀血较重，可见较多出血点，未见溃疡；低剂量组大鼠胃粘膜轻度充血水肿， Ⅱ 见多个线状出血点或较小溃疡，瘀血较为明显。雷尼替丁组大鼠胃粘膜表面光滑， 轻度瘀血，未见溃疡，仅见少量出血点。 (四)光学显微镜下观察 正常对照组大鼠胃粘膜层光整完好，腺体排列整 齐，未见炎细胞浸润及粘膜下出血倾向。模型组大鼠胃粘膜部分中断，溃疡表面覆 盖大量红细胞，溃疡处腺体完全破坏，对应固有层和粘膜F层毛细血管内可见少量 瘀血，部分毛细血管破裂出血及渗出；粘膜下层小动脉内可见血栓形成，也可见嗜 酸粒细细胞浸润；部分溃疡深及肌层，可见平滑肌细胞排列紊乱或出现断裂。左金 丸高剂量组仅见上皮细胞肿胀，腺体间隙扩大，其他部分及粘膜下层微循环无明显 病理改变。中剂量组大鼠胃粘膜腺体间隙扩大，粘膜F层小动脉内可见血栓形成， 未见明显溃疡。低剂量组大鼠胃粘膜溃疡破坏粘膜下层，未达肌层；粘膜下层微循 环淤滞，病理变化明显。雷尼替丁组情况类似左金丸高、