3化妆品中双羟甲基咪唑烷基脲检测方法.doc

附件3 化妆品中双羟甲基咪唑烷基脲检测方法 1 适用范围 本方法规定了采用碱破坏和柱前衍生化液相色谱-紫外检测法测定化妆品中双羟甲基咪唑烷基脲（CAS78491-02-8）的方法。 本方法适用于化妆品中双羟甲基咪唑烷基脲的含量测定。 2 方法提要 双羟甲基咪唑烷基脲的测定采用强碱破坏，使双羟甲基咪唑烷基脲释放甲醛达恒定程度，然后通过柱前衍生化法，使甲醛与2，4-二硝基苯肼反应生成黄色的2，4-二硝基苯腙，经高效液相色谱分离，紫外检测器在3 nm波长下检测，根据保留时间定性，峰面积定量。本方法对双羟甲基咪唑烷基脲的检出限为0.1 μg，定量下限为0.2 μg；若取0.2 g样品测定，本方法对双羟甲基咪唑烷基脲的检出浓度为0.05 %，最低定量浓度为0.1 %。试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为去离子水。 双羟甲基咪唑烷基脲纯度 ≥ 9.0% 。2，4-二硝基苯肼，纯度 ≥ 99.0%。 氯仿，色谱纯，含量 ≥ 99.9%。 盐酸(20 =1.19 g/mL）。 氢氧化钠。 磷酸氢二钠（Na2HPO4?12H2O）。 磷酸二氢钠（NaH2PO4?2H2O）。 乙腈，色谱纯。 甲醇，色谱纯。 3.10 水。 3.11 2，4-二硝基苯肼盐酸溶液：称取2，4-二硝基苯肼（3.2）0.20 g，置于锥形瓶中，先加浓盐酸（3.4）40 mL使溶解，必要时可超声助溶，再加（3.10）60 mL，摇匀，即得。 3.12磷酸缓冲溶液（5 mol/L）：精密称定NaH2PO4?2H2O3.7）2.28 g和Na2HPO4?12H2O3.6）12.67 g，加水适量溶解后，转移到100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 3.13氢氧化钠溶液[(（NaOH）= 1 mol/L]：称取NaOH（3.5）10 g，加水适量溶解后，转移到250 mL量瓶中，用去离子水（3.10）稀释并定容至刻度，摇匀，即得。 3.14 氢氧化钠溶液[(（NaOH）= 2 mol/L]：称取氢氧化钠（3.5）8 g，加水适量溶解后，转移到100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。 3.15 盐酸水溶液 [(（）= 2 mol/L]：量取浓盐酸16.7 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 3.16 乙腈水溶液（7+3）：量取乙腈140 mL，置锥形瓶中，加水60mL，摇匀，即得。 3.17 乙腈水溶液（9+1）：量取乙腈180 mL，置锥形瓶中，加水20mL，摇匀，即得。 3.18 系列浓度双羟甲基咪唑烷基脲标准溶液：精密称取双羟甲基咪唑烷基脲（3.1）0.2g（准确至0.001g）至10 mL量瓶中，加乙腈水溶液（7+3）（3.16）适量溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为20 mg/mL的浓储备液。然后按照表1，以乙腈水溶液（7+3）3.16）为稀释溶液配制系列浓度双羟甲基咪唑烷基脲标准溶液。 表1 系列浓度双羟甲基咪唑烷基脲标准溶液配制 工作溶液 溶液初始浓度 量取体积 定容终体积 标准溶液终浓度 储备溶液1 20 mg/mL 1 mL 10 mL 2 mg/mL 储备溶液2 20 mg/mL 2.5 mL 10 mL 5 mg/mL 标准溶液1 2 mg/mL 5 mL 10 mL 1 mg/mL 标准溶液2 5 mg/mL 1 mL 10 mL 0.5 mg/mL 标准溶液3 2 mg/mL 1 mL 10 mL 0.2 mg/mL 标准溶液4 mg/mL 1 mL 10 mL 0.1 mg/mL 标准溶液5 0.5 mg/mL 1 mL 10 mL 0.05 mg/mL 标准溶液6 0.2 mg/mL mL 10 mL 0.02 mg/mL 4 仪器 4.1 高效液相色谱仪：具有紫外检测器。 4.2 分析天平：感量0.001 g。 4.3 超声波清洗仪。 4.4 离心机。 5 测定步骤 5.1 样品处理 称取化妆品样品0.2g（精确至0.001 g），置中，加乙腈水溶液（3.17）2.0 mL，涡旋2 min，使混匀，以5000 rpm转速离心10 min。取上清液1 mL置5 mL 离心管中，加氢氧化钠水溶液（3.14）1 mL，涡旋30 s，室温静置20 min，再加盐酸水溶液3.15）1 mL，涡旋30 s，以00 rpm转速离心5 min，准确量取1.0 mL置10 mL离心管中，加2，4-二硝基苯肼盐酸溶液3.11）0.4 mL，涡旋1 min，静置2 min，加磷酸缓冲液3.12）0.4 mL，再加氢氧化钠溶液（3.13）2 mL，涡旋10 s，然后加入4 mL 氯仿，涡旋3 min，静置10 min，取氯仿层溶液1.0 mL置离心管中，以5000 rpm转速