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■ 核酶的组成分类 核酶的种类很多，现在有许多工程核酶。根据核酶的结构和催化反应可分为三种类型: ● RNA和蛋白质复合物 如核糖核酸 ● 小分子的RNA 各种具有催化作用的小分子RNA，能够进行分子内自我切割反应，且不需蛋白质参与。这些RNA分子可以分为两个部分，一部分是底物，另一部分是酶。将具有酶活性的序列克隆后可制成人工核酶去作用于独立的底物。 ● Ⅰ、Ⅱ型内含子 这两种核酶具有将自身从前体mRNA中剪接出去的作用。体外实验证明这种剪接反应仅仅是RNA本身就可以了，但是在体内，需要有辅助蛋白的参与。 上述三种类型的核酶都有一个共同的特点，即都涉及磷酸二酯键的切割或连接。它们作用的底物是RNA，可以是RNA分子本身，也可以是别的RNA分子。 6.4.3 内含子的切除: 核酶的作用机理 除了rRNA前体中有内含子,tRNA和mRNA前体中都有内含子的存在,这些内含子都要通过加工被切除,才能得到成熟的rRNA、tRNA或mRNA。虽然这些RNA中内含子切除的机理各不相同,但都涉及到核酶的作用。 ■ 核剪接(nuclear splicing) 真核生物的结构基因中一般都含有内含子， 转录后，从pre-mRNA中将内含子切除，然后将外显子重新连接成一个成熟的mRNA的过程称为RNA剪接(RNA splicing 鸡的卵清蛋白基因初始RNA转录物的剪接 核剪接是指发生在细胞核中，主要是对hnRNA中内含子的剪接。有三个主要特点∶一是在pre-mRNA中内含子与外显子间有特征性序列，即GT-AG规则；第二是剪接过程中需要snRNA参与，并要形成剪接体；第三要形成套索结构。 ● GT-AG 规则(GT-AG rule) :前体RNA中参与内含子剪接的两个特殊位点，即在内含子和外显子交界处有两个相当短的保守序列: 5＇端为GT， 3＇端为 AG， 称为GT-AG规律。 ● 剪接体(spliceosome): 在剪接过程中形成的剪接复合物称为剪接体，剪接体的主要组成是蛋白质和小分子的核RNA(snRNA)。 ● 套索(lariat)的形成和释放 内含子的剪接分为两个主要的阶段。第一阶段是从内含子的5＇端开始切割，将左边的外显子与右边的内含子-外显子分开，左边的外显子是一个线性分子，右边的内含子-外显子形成一个套索结构，在套索结构中，内含子的5＇端同内含子右侧一个碱基相连形成一个环。第二个阶段是在剪接位点的3＇端切割，释放套索中的内含子，同时右边的外显子与左边的外显子连接起来，切割和连接反应不是独立的，而是协同进行的 6.4.4 RNA编辑(RNA editing) RNA编辑是指在mRNA水平上改变遗传信息的过程。最典型的例子是锥虫(trypanosome)动质体(kinetoplastid)的线粒体基因mRNA的编辑，涉及上百个U的缺失和添加。 ■ RNA编辑的意义 由于RNA编辑是基因转录后在mRNA中插入、缺失或核苷酸的替换而改变DNA模板来源的遗传信息，翻译出多种氨基酸序列不同的蛋白质，RNA编辑的结果不仅扩大了遗传信息，而且使生物更好地适应生存环境。有些基因的主要转录产物必须经过编辑才能有效地起始翻译，或产生正确的可读框(ORF)。 重　点 概念： 核酶、多聚核糖体、反义RNA １、核糖体化学结构和组装规则 ２、反义RNA的作用 * E.coli前体rRNA的转录与加工 6.2.2 核糖体的装配 核糖体是自我装配的细胞器，当蛋白质和rRNA合成加工成熟之后就要开始装配核糖体的大小两个亚基，真核生物核糖体亚基的装配地点在细胞核的核仁部位，原核生物核糖体亚基的装配则在细胞质中。 ■ 核糖体亚基的自我装配 ● 自组装(self-assembly): 1968年， Masayasu Nomura把拆开的大肠杆菌核糖体的30S小亚基的21种蛋白质与16S rRNA在体外混合后重新装配成30S小亚基， 然后把重建的小亚基同50S大亚基以及其他辅助因子混合后， 进行蛋白质合成实验，发现重建的核糖体具有生物活性，能催化氨基酸掺入到蛋白质多肽链中。这一实验表明，核糖体是一种自组装(self-assembly)的结构，即没有样板或亲体结构所组成的结构。但是在组装过程中，某些蛋白质必须首先结合到rRNA上，其他蛋白才能组装上去，即组装过程有先后层次(下图)。 E.coli 小亚基的装配图 粗箭头表示结合力强，细箭头表示力弱。如S4与16S rRNA之间是粗箭头，表示S4可直接与16S rRNA结合而不需要其他蛋白的存在。而S7与16S rRNA的结合力很弱，并且需要S4、S8、S9、S19、S20蛋白的存在。 ● 30S亚基蛋白质分类: 根据在核糖体重装配过程中的作用，可将30S亚基上的蛋白质分为三类:①开始装配所必需的蛋白质，它们先和