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第九章 DNA序列测定 末端终止法--待测单链DNA 模板 引物 四种dNTP(其中一种用32P/35S标记) 终止剂(ddNTP) DNA聚合酶 Sanger发明：两次获得诺贝尔奖 分别得到ddA ddT ddG ddC结尾的片段 测序过程: 1.模板与引物杂交 2.引物的延长和合成阻断 四个试管分别加入 DNA聚合酶 dNTP 标记底物 终止剂不同 ddA ddG ddC ddT 四个试管中所有产物是一系列长度只差一个核苷酸的聚合链 3.电泳 ACGT次序 高压电泳 4.放射自显影得到直读图象 第十章 核酸分子杂交技术 概念：具有互补序列的两条核酸单链在一定条件下，按碱基配对原则形成双链的过程。 探针 待测核酸 杂交分子 核酸分子杂交的基本原理 核酸分子杂交的基本方法 探针的标记 核酸分子杂交的基本原理 DNA变性 方法 热变性：90~100℃ 酸碱变性：常采用碱变性 化学试剂变性：尿素、甲酰胺、甲醛等 特点：粘度增加、密度增加、增色效应、溶解温度(melting temperature,Tm) DNA复性或杂交(hybridization) DNA/DNA,DNA/RNA,RNA/RNA等 影响杂交的因素 核酸分子的浓度和长度 浓度大，复性快；