4-2014-工作手册-第四章-第四节-兽药及违禁药物.docVIP

第四节兽药及违禁药物 1动物源性食品中β-受体激动剂残留GC/MS法测定的标准操作程序 1 适用范围 本程序适用于动物源性食品中10种β-受体激动剂残留的气相色谱—质谱联用法测定。 当试样取5.0g时，本方法10种β-受体激动剂的检出限为0.5μg/kg～1.0μg/kg,定量限为1.0μg/kg ～2.0μg/kg。 2 原理 本方法采用β-葡萄糖苷酸酶／芳基硫酸酯酶解动物组织，然后通过固相萃取柱净化，用双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+1%（φ）三甲基氯硅烷（TMCS）衍生后采用GC/MS测定动物组织中10种β-受体激动剂残留，同位素内标法定量。 3 试剂 除非另有说明，所有试剂均为分析纯。 3.1 甲醇（色谱纯）； 3.2 盐酸； 3.3 正己烷； 3.4 乙酸乙酯（色谱纯）； 3.5 氨水； 3.6 无水硫酸钠，于450℃灼烧4h，冷却后贮于干燥器中备用。 3.7 特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、马布特罗、西马特罗、班布特罗、克仑潘特、苯氧丙酚胺、卡布特罗；莱克多巴胺标准品。 3.8 D9-克伦特罗、D3-沙丁胺醇、D5-莱克多巴胺内标。 3.9 β-葡萄糖苷酸酶／芳基硫酸酯酶购自Sigma； 3.10 双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+1%（φ）三甲基氯硅烷（TMCS）。 3.11 β-受体激动剂标准储备溶液：分别称取各种受体激动剂标准品10mg于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，存放在-18℃冰箱中备用；受体激动剂混合标准使用液用甲醇稀释至0.1mg/L。 3.12D9-克伦特罗、D3-沙丁胺醇、D5-莱克多巴胺（1.0mg/L）受体激动剂内标混合液：使用时用甲醇稀释储备液至1.0 mg/L混合液。 4 仪器与耗材 4.1 气相色谱质谱仪。 4.2 漩涡混匀器。 4.3 氮吹仪。 4.4 具塞刻度试管:10 mL。 4.5 固相萃取仪。 4.6 离心机:最低转速8，000r/min 4.7 SLW 固相萃取柱:规格为500mg/6ml（杭州福裕科技服务有限公司）。 5 操作步骤 5.1 样品采集、制备、保存 动物组织(包括肌肉、肝脏、肾脏、肺等)采集200_500g,取肌肉部分用组织捣碎机（或者榨汁机）绞碎，四分法取50—100g，放在具塞玻璃瓶或者食品袋中，贴上标签后，放在-18℃冰箱冻藏。 5.2 样品酶解 称取5.0g经绞碎均匀的动物组织于50mL离心管中,分别加50μL 1.0 mg/L受体激动剂内标混合液，静置10min，加入15ml0.2mol/LpH5.2乙酸钠-醋酸缓冲液，用匀质机匀质20s，加入50μLβ-葡萄糖醛苷酶／芳基硫酸酯酶液，在37℃水浴中水解16h后取出冷却，8，000 r/min离心10min，分出上层溶液，（注意如果液面有脂肪析出，可以用棉花过滤）用2.0mol/盐酸溶液调节至2.0±0.1(pH测定仪)，再在8，000 r/min离心10min，分出上清液待用。 5.3 样品净化 取SLW（或者SLS）固相萃取柱，先用甲醇5mL、水5mL、50mmol/L盐酸5mL活化柱子,然后将10mL上清液加到柱子上过柱,再用5mL水淋洗除杂，真空泵抽干5min，先用5mL甲醇洗脱，然后用10ml5%氨化乙酸乙酯洗脱收集，在50℃水浴中氮气吹干。 5.4 样品衍生 蒸发剩余物加0.1mL双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA） +1%（φ）三甲基氯硅烷（TMCS），在80℃的烘箱中加热衍生1.0h，氮气吹干，加0.2mL甲苯溶解；另外分别取标准溶液，加50μL内标使用液，氮气吹干后与样品同时进行衍生化。取1.0μL甲苯溶液进行GC-MS分析。 5.5 样品分析 5.5.1 色谱质谱参考条件 a) HP—5 MS 5%苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)或等同柱； b) 进样口温度: 280℃； c) 柱温:初温100℃，保持3min，然后以10℃／min升至280℃，保持5min,300℃postrun 5min； d) 载气:氦气，纯度≥99.999％，流速1mL/min； e) 进样量: 1-2μL； f) 电离方式：EI源, 70eV。 g) 离子源温度：230℃； h) 进样方式：不分流进样; i) 溶剂延迟：11min。 5.5.2 选择离子监测方式:监测离子见下表1,标准总离子流图见下图1, 样品空白离子流图见图2。 表1参考保留时间及监测离子 化合物 内标 保留 时间 定量离 子m/z 定性离子 m/z 检测限 μg/kg 定量限 μg/kg 马布特罗 D9—克伦特罗 11.39 86 277、296、367 1.0 2.0 特布他林 D3-沙丁胺