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艾滋病的特异性实验室检查及临床意义 第四军医大学唐都医院 全军感染病诊疗中心 康文臻 历史回顾 1981 卡波济肉瘤（kaposi’ sarcoma）病例 1982 正式提出了AIDS或艾滋病的概念 1983年5月“Science”同时发表了法国巴斯德研究所的蒙泰尼埃(Luc Montagnier)和美国国立癌症研究所的盖洛(Robert Gallo)的论文 。 1986年 统一命名 HIV病原学 HIV属逆转录病毒科慢病毒属，颗粒呈球形，直径90 nm～130nm。病毒的核心呈中空锥形，由两个单链的RNA 分子组成，中间有一个柱状核心，外面包一层球形膜，由宿主细胞膜和病毒特异性糖蛋白组成。 HIV有9个基因控制着结构和调节的功能 3个结构基因(gag、env 、pol）控制病毒结构成分蛋白质的组成； gag基因编码病毒的核心蛋白；pol基因编码病毒复制所需要的酶类（逆转录酶、整合酶和蛋白酶）；env基因所编码病毒包膜蛋白，是HIV免疫学诊断的主要检测抗原。 6个调节基因〔tat, vif, vpr, vpx (vpu), nef, rev〕控制病毒感染细胞、整合进宿主细胞遗传物质，以及复制新病毒的能力。调控基因编码辅助蛋白，调节病毒蛋白合成和复制。 诊断原则 艾滋病是由人类免疫缺陷病毒（HIV）感染引起，以严重免疫缺陷为主要临床特征的传染病，其感染各期的确诊必须根据流行病学接触史、临床表现和实验室检查结果综合分析，慎重诊断。 无论处于哪一期的HIV感染，必须要有抗HIV抗体阳性或HIV抗原阳性的实验室检测依据。HIV实验室检测方法包括：病毒分离培养、抗体检测、抗原检测、病毒核酸检测、病毒载量检测。 艾滋病的特异性实验室检查 HIV感染的检测 对病毒及其成分的检测 病毒感染后机体特异性和反应物（抗体、  特异性免疫细胞等）的测定， 感染者及感染病毒状态的检查 病毒水平 生物学特性及作用 机体免疫系统状况 HIV感染的检测 目前作为诊断手段使用的检测主要包括 抗HIV病毒抗体检测 病毒培养 核酸检测 抗原检测 血清学检测 在感染HIV-1后，患者血清中最先出现p24抗原，继之，各种HIV-1抗原可达到高峰；2-6周后，随着HIV-l抗体产生及浓度的不断增加，HIV-l抗原渐趋降低或检测不出。 HIV抗体检测 ?? HIV感染后必须要以实验室检查为基础。我国现阶段HIV实验室检测主要为HIV抗体检测。HIV抗体检测需要经过初筛和确认试验。 初筛试验可选择酶联免疫吸附试验（ELISA）、明胶颗粒凝集试验（PA）、免疫荧光法（IF）、免疫酶法（IE）、乳胶凝集试验（LA）等。初筛试验结果阳性后，再做确认试验。 常用的确认试验为蛋白印迹法（WB）。确认试验阳性时才能确定为HIV感染 HIV抗体初筛实验 初筛检测通常由取得资格的HIV-1抗体初筛实验室和／或确认实验室中进行，HIV-1抗体确认和HIV-1抗体阳性报告必须由取得资格的确认实验室进行。 初筛试验初筛试验用于检测HIV特异性抗体总量。使用的抗原分细胞内HIV抗原及细胞外HIV抗原。 血清HIV-1抗体检测 检测HIV抗体是常规使用的HIV病原学诊断方法。临床通用的是酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹法（WesternBlot）和目前开始推广的快速诊断法。 感染HIV-1后，机体针对HIV-1基因编码的抗原性物质产生相应抗体，在临床上具有重要诊断学意义的主要是对抗结构基因编码抗原(如gpl60，gpl20，gp41，p66，p55，p51，p31，p24，p17等)的抗体。 HIV抗体初筛检测——HIV 酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA） 明胶颗粒凝集实验（gelatine particle agglutination assay，PA） 乳胶凝集实验（latex agglutination assay，LA） 各种快速检测实验（rapid tests）放射免疫实验（radio immunoassay） 方法和原理 酶联免疫吸附试验(Ezyme linked immunosorbentassay，ELISA)简称酶标法，是根据酶免疫测定原理发展的一种技术，其基本方法分三类：间接法、双抗原夹心法和抗体竞争法。 实验使用的抗原 第一代试剂：完整病毒的裂解主物 假阳性反应、制备和纯化比较困难、危险性大。 第二代试剂：重组或合成多肽HIV抗原 敏感性和特异性均有所提高，更为安全、容易、重复性好。有时由于含有载体的组分而出现假阳性结果