产碱性蛋白酶菌株的分离.docVIP

产碱性蛋白酶菌株的分离  摘 要 本设计为了研究碱性蛋白酶的性质和它的相关作用，以及产碱性蛋白酶菌株的获得。设计内容主要分为两部分：产碱性蛋白酶菌株的筛选分为初选和复选；酶活力的测定；第一部分分为三个实验设计对菌株进行富集、平板分离初筛、药瓶发酵复筛；第二部分通过透明圈法初步进行测定再在不同温度不同PH下对酶性质进行测定，为碱性蛋白酶的研究和治疗提供一定的理论及实验基础。对碱性蛋白酶的应用提供理论依据，及时的将理论转化为生产力，提高工业生产的效益。 关键词：碱性蛋白酶； 菌株； 分离 目 录 第一部分： 文献综述 1．碱性蛋白酶 3 1.1简介 3 1.2碱性蛋白酶的理化性质 3 1.3酶的结构和活性中心 3 1.4碱性蛋白酶的专一性 4 2. 碱性蛋白酶的分类 4 2.1命名 4 2.2类型 4 3. 碱性蛋白酶的应用 5 3.1碱性蛋白酶在食品中的应用 6 3.2碱性蛋白酶在洗涤用品中得到广泛的应用。 6 3.3 碱性蛋白酶在羊毛制品中的应用 6 3.4 碱性蛋白酶在词料工业中的应用 7 3.5 碱性蛋白酶在其它领域的应用 8 4. 产碱性蛋白酶菌株 8 4.1生产菌株的种类 8 4.2 碱性蛋白酶工程菌的选择 8 5. 碱性蛋白酶的研究前景 9 第二部分 课程设计部分 1. 材料 12 1.1 土样 12 1.2 培养基 12 1.3 主要实验仪器 12 2. 实验方法 12 2.1菌株的分离方法 12 2.2 酶活力的测定 13 3 设计 14 3.1产碱性蛋白酶的分离 14 3.2.碱性蛋白酶活力的测定 14 4总结 15 5设计体会 15 参考文献 16 第一部分 文献综述 1．碱性蛋白酶 1.1简介 碱性蛋白酶(alkaline protease) 是一类适宜于在碱性条件下水解蛋白质肽键的酶类 是一类非常重要的工业用酶 广泛存在于动、植物及微生物生物体中 在猪的胰脏中最早被发现。碱性蛋白酶在食品、洗涤及制革等行业中有着广泛的用途。微生物蛋白酶均为胞外酶，它的处理技术相对简单、价格低、来源广、菌体易培养、产量高、高产菌株选育简单快速、具有动植物蛋白酶的所有特性，以与工业化生产。近几年，碱性蛋白酶的研究有很大的进展，取得了许多可喜的成果，及时的转化成生产力，有很大的社会和生产效益。 1.2碱性蛋白酶的理化性质 微生物的碱性蛋白酶的活性作用范围在PH值7-11之间，在酪氨酸中最适范围为9-11之间，它可以水解肽键、酰胺键、醚键以及转酯、转肽等[1]。多数微生物产生的碱性蛋白酶耐热性差，我国生产的几种碱性蛋白酶耐热温度均在60℃以下。 1.3酶的结构和活性中心 碱性蛋白酶的分子量一般在2.0-3.4万之间，等电点多为8.0-9.0，能作用于多数肽链，水解肽键生成二肽类物质。其除酶本身的氨基酸残基外不具有特定的活性基团因此一些金属离子(Fe2+,Mn2+,Mg2+,Zn2+等)对酶有激活作用。碱性蛋白酶属丝氨酸蛋白酶具有蛋白质的基础生化性质一些生化物质均能引起其变性失活一些天然植物中也有蛋白酶抑制剂[2]。 1.4碱性蛋白酶的专一性 碱性蛋白酶具有底物专一性当它与底物结合时依靠物理引力的作用首先形成非共价的酶-底物复合物接着丝氨酸轻基攻击底物产生四面体中间产物随后中间产物破裂形成酶-产物复合物碱性蛋白酶的专一性强烈地受到切开位点两侧氣基酸残基尤其是第1和第4位氨基酸残基的影响较之血红蛋白或牛血清蛋白它更容易酶解酪蛋白[3]。可将碱性蛋白酶分为四种类型依据其对切开位点 基侧氨基酸残基的专一性[4]—、对如精氨酸、赖氨酸等碱性氨基酸残基具有专一性该类酶与胰蛋白酶相似二、如枯草杆菌碱性蛋白酶等该类酶主要表现为对疏水性氨基酸残基或芳香族具有有较强的专一性三、如溶解细菌细胞壁的蛋白酶该类蛋白酶表现出对小分子脂肪族氨基酸残基具有专一性四、如葡萄球菌碱性蛋白酶该类酶对酸性氨基酸残基存在专一性。 2. 碱性蛋白酶的分类 2.1命名 碱性蛋白酶一般按照其所产菌株的名称进行命名如丹麦诺维(Novo)公司的卡斯柏格枯草杆菌碱性蛋白酶(Subtilisin carlsberg)是卡斯伯格枯草芽孢杆菌生产的碱性蛋白酶Subtilisin Novo是由另一株枯草芽孢杆菌Novo生产的Nagase公司将枯草杆菌N所产的碱性蛋白酶取名SubtilisinBPN[5]。 2.2类型 产碱性蛋白酶的微生物从生态上可以分成两类一类是适于在中性pH条件下生长并产酶的细菌如枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等另一类是只在pH 8-10的环境中生长和产酶的嗜碱微生物。碱性蛋白酶大致分为两种类型[6] A型,由短小芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌生产其性质和结构与枯草芽孢杆菌喊