水霉菌生物膜体外模型构建及结构特征.pdfVIP

第37卷第9期 中国预防兽医学报 V01．37．No．9 2015年9月 PreventiVe 2015 ChineseJoumalof Medicine Sep． VeterinaU doi：10．3969／j．issn．1008—0589．2015．09．05 水霉菌生物膜体外模型构建及结构特征 俞 军1+，袁海兰1+，欧仁建2，胡鲲1，杨先乐P 1．上海海洋大学国家水生动物病原库，上海201306；2成都市龙泉驿区水务局，四川成都610100 摘 要：为体外构建水霉菌生物膜 BF 并对其形成过程与结构特征进行分析，本研究利用寄生水霉 White M2R染色 在BF形成过程中，采用CCK．8法 CeUCounting鼬t．8 定量检测BF的活力变化，利用Calconuor 后，荧光显微镜观察细胞外基质；扫描电镜观察水霉菌BF的形态结构；SYT09／PI染色后，激光共聚焦显微镜 观察水霉菌BF的活力及结构特征。结果显示，水霉菌能够在聚乙烯网片上形成较好的BF，并且BF能够与聚乙 烯网片紧密粘附，完全覆盖聚乙烯网片，而与盖玻片粘附不紧密。水霉茵BFOD。。值在培养前24h升高较快， 48 h～24 h～ h后趋于稳定。水霉菌在第6h即开始有散在的孢子黏附于聚乙烯网片上；12 h形成单细胞层；36 60 h为中间形成阶段，至72h茵丝缠绕形成多层的、弥散着大量细胞外基质的立体结构，同时死亡茵随着培养 时间延长而增多。本研究体外构建了水霉菌BF并了解其结构特征，为水霉菌BF的进一步研究奠定了基础。 关键词：水霉菌；生物膜；体外模型；结构特征 中图分类号：S852．61 文献标识码：A EstabIishmentOf，n忻f阳mOdelOf biOf¨mand Sap厂．O／e9几『a structuraI OnitS characteriStiCS inVeStigatiOn Yu xian-lel’ Jun卜，YUANHai-lanp，OURen-jian2，HuKu吐YANG collect冉ncenterof 0cean 1．state AquaticPtthogen，shan曲ai 201306，china univers时，shan曲ai AffairS 2．Water Bureauof LongquanyiDismct，Chen酣u610100，China Abstract：Toestablishan伽订n．omodeland thestmctumlcharacteristicsof biofllmof investigate Sapm』eg力招biofilm，the ATCC200013was on slideand biofilmwasmeasllred Saproj9911招parasj如a deVelopedglass polyethylenenetting．TheactiV时of and detectthe characteristicsof quantitativelyanalyZedCCK-8 CeUCountingKit-8 to process．MorphologicalS．pafasj如a by wasobservedundernuorescence stainedCalcofluorWhite electmn confocallaser microscopeby M2R，scanningmicroscope，and stainedsYT09／PI．Tlleresultsshowedthatbiofilmwasableto on scanning e珩cientlyp01yethylene microsc叩yby deVel叩more manthaton biofilmadheredt0 andcoVeredit the netting glassslide．S．pamsjⅡca polyethylenenettingtightly completely，while biofilmon slidewas tofallo正The of biofilm befbre24tlrsandstabilized 0D450哪value glass easy S．parasjdcadevelopedquickly after48 adheredtomaterialsoccurredat6 inten、Vinedtof-om strLlctIlrefbm12 to hrs，hyphae layer 11rs．S．para鲥打caspore single hrS． nlree at72hrS．111the 24Ilrsalldmiddle was舶m36to60 Thenme