动物细胞融合与单克隆抗体课件(用).pptVIP

一、动物细胞融合 请同学们阅读课本P52动物融合 一、动物细胞融合 3、动物细胞融合过程 动物特异性免疫 分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn） 细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。） 第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。 提取单克隆抗体。 * * 生物种间杂交想像图 已成功的动物细胞融合实例有很多，如人—小鼠、人—兔、人—鸡、鼠—兔、鸡—鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌—鸡 、人—胡萝卜 等细胞的融合。 想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合和单克隆抗体的最新信息。 有梦想，才会有创造！ 1.概念： 动物细胞融合（cell fusion）也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。 2、原理： 细胞膜的流动性 为什么灭活的病毒能作诱导剂？ 灭活丧失感染性 保留融合活性 二.动物细胞融合 诱导融合的方法 物理法： 化学法： 生物法： 电激、离心、振动 聚乙二醇（PEG 灭活的病毒 4.意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 5.应用： 最重要的用途是制备单克隆抗体 总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合 用 途 诱 导 方 法 融合前处理 原 理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 用纤维素酶、 果胶酶去壁 用胰蛋白酶 使细胞分散 物理、化学方法 物理、化学、 生物方法 获得部分 或完整植株 主要用于制备 单克隆抗体 二、单克隆抗体 什么是单克隆抗体 单： 克隆： 抗体： 单个细胞？ 无性繁殖 抗原 ———— 抗体 特异性结合 抗体是由何种细胞产生的？ 2 . 抗体是如何产生的？ ？ 单克隆抗体 抗原 动物体内 刺激 浆细胞 抗体 抗体不纯 筛选单一浆细胞 不能增殖产生大量抗体 产量少、纯度低、特异性差 单克隆抗体 4、传统制备抗体的缺点是？ 3、传统制备抗体的方法是？ 如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 单克隆抗体 问题讨论 提示： 1 . 什么样的细胞可以产生抗体？ 2 . 什么样的细胞可以无限增殖？ 设计方案： 一个B淋巴细胞:只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞:能无限增殖 杂交瘤细胞 单克隆抗体 既能无限增值又能产生特异性抗体 特点 杂交 细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 B BB B瘤 瘤瘤 瘤 细胞融合后培养液中有几种细胞？ 筛选杂种细胞 已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，获得杂种细胞。 单克隆抗体 思考： 单克隆抗体 思考： 1. 小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？ 2. 制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？ 细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活 细胞融合技术、细胞培养技术 单克隆抗体 ① 在基础理论研究中具有重要意义 ② 在疾病诊断、治疗和预防方面，具有特异性强、灵敏度高等优越性。 ③ 生物导弹（作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤） 单克隆抗体的应用 单抗的制备过程要点： *