第二章核酸的化学最新精要.ppt

The Chemistry of Nucleic Acid 一、核酸的发现和研究工作进展 1868年 Fridrich Miescher从脓细胞中提取“核素” 1944年 Avery等人证实DNA是遗传物质 1953年 Watson和Crick发现DNA的双螺旋结构 1968年 Nirenberg发现遗传密码 1975年 Temin和Baltimore发现逆转录酶 1981年 Gilbert和Sanger建立DNA 测序方法 1985年 Mullis发明PCR 技术 1990年 美国启动人类基因组计划(HGP) 1994年 中国人类基因组计划启动 2001年 美、英等国完成人类基因组计划基本框架 三、核酸的生物功能 一、核酸的化学组成 3.体内重要的游离核苷酸及其衍生物 含核苷酸的生物活性物质： NAD+、NADP+、CoA-SH、FAD 等都含有 AMP 一、DNA的分子结构 定义 核酸中核苷酸的排列顺序。 由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。 RNA的基本组成单位是AMP、GMP、CMP及UMP。含有稀有碱基。 RNA通过3’，5’磷酸二酯键连接形成多核苷酸链。 RNA主要是单链结构，局部可卷曲形成双链螺旋结构，或称发夹结构。碱基氢键配对 A＝U，G≡C。 RNA易被碱水解，DNA不易被水解。 原核生物mRNA结构特点 一般都为多顺反子结构。即一个单链mRNA分子可作为多种多肽和蛋白肽链合成的模板。 mRNA的转录和翻译是耦合的， 即mRNA分子一边进行转录，同时一边进行翻译。 mRNA分子包含有先导区、翻译区和非翻译区，即在两个顺反子之间有不参加翻译的插入序列。 真核生物mRNA结构特点 mRNA的3’-末端有一段多聚腺苷酸（polyA),　5’-末端有帽子结构。 mRNA一般为单顺反子，即一个mRNA分子只为一种多肽编码。 mRNA的转录和翻译是分开进行的，先在核内转录产生hnRNA,转运到胞质内后，再在核外加工为成熟的mRNA，然后起翻译作用。 热变性 解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对OD260（absorbance260，OD260代表溶液在260nm处的吸光率）值作图，所得的曲线称为解链曲线或热变性曲线。 一、核酸的分离、提纯和定量测定 (三) 核酸含量的测定法 （1）定磷法 （2）定糖法 （3）紫外吸收法 * rRNA的结构 3.核蛋白体RNA的结构与功能 * rRNA的功能 参与组成核蛋白体，作为蛋白质生物合成的场所。 16S rRNA * rRNA的种类（根据沉降系数） 真核生物 5S rRNA 28S rRNA 5.8S rRNA 18S rRNA 原核生物 5S rRNA 23S rRNA 16S rRNA 核蛋白体的组成 占总重量的35% 49种 占总重量的30% 31种 蛋白质 4718个核苷酸 160个核苷酸 120个核苷酸 28S 5.85S 5S 2940个核苷酸 120个核苷酸 23S 5S rRNA 60S 50S 大亚基 占总重量的50% 33种 占总重量的40% 21种 蛋白质 1874个核苷酸 18S 1542个核苷酸 16S rRNA 40S 30S 小亚基 真核生物（以小鼠肝为例） 原核生物（以大肠杆菌为例） 核 酸 的 理 化 性 质 The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid 第 三 节 目 录 一、一般理化性质 两性物质，通常表现为酸性 DNA纯品为白色纤维状固体，RNA纯品为白色粉末，均微溶于水，不溶于有机溶剂 DNA溶液的粘度极高，而RNA溶液要小得多 核酸可被酸、碱或酶水解 DNA与RNA的显色反应 核酸的水解 (一) 酸水解 糖苷键比磷酸酯键更易水解，特别是嘌呤与脱氧核糖之间的糖苷键很容易水解。 (二) 碱水解 通常用于RNA水解，DNA的碱水解比较困难。 2’,3’环磷酸酯 3’核苷酸 2’核苷酸 (三) 酶水解 蛇毒磷酸二脂酶 3’ 5’外切核酸酶 脾磷酸二脂酶 5’ 3’ 外切核酸酶 外切核酸酶 牛胰核糖核酸酶 内切核酸酶 双链DNA分子可以被上千种从微生物中分离得到的限制性内切酶（restriction enzyme）切断, 又可以再连接起来。切断的过程不需要能量，而连接的起来的过程却需要2个分子的ATP。这就是分子克隆和DNA重组技术的基础。 DNA与限制性内切酶 DNA连接酶 大部分限制性内切酶识别的碱基序列为4~ 6 个碱基的回文顺序。它们在微生物细胞内发挥的作用是防御外来DNA入侵的国防军的作用。 核糖和脱氧核糖的显色反应 O HOH2C OH OH OH 1 2 O HOH2C O