趋化因子受体CCR4及其配体CXCL12在肝细胞癌转移中的研究.pdfVIP

摘要 目的 研究表明趋化因子受体在许多肿瘤细胞表达，与肿瘤细胞的迁移 与转移有密切关系。本研究拟探讨趋化因子受CXCR4及其配体 CxCLl2在肝细胞癌细胞、肝癌组织中的表达及在肿瘤迁移中的作 用。 研究方法 (1)采用R1-PCR和wbstemBlot检测43例肝细胞癌组织及癌 旁组织和肝细胞癌细胞株MHCC97、人脐静脉内皮细胞株(】Hhlm雏 umbilicalveill锄d础elial cells，HI舰Cs)中CxCR4的表达。 癌组织内的CxCLl2的表达。 含量。 (4)以48孔微趋化板(BoydenTf姐swells)检测重组人CxI咒12、 肝细胞癌癌性腹水对MHCC97和琢ⅣECs的趋化影响。 MHCC97，建立稳定转染的细胞株，R1．-PCR及流式细胞仪分别从 n1】埘A水平和蛋白质水平检测其表达CXCR4表达变化的情况，趋化 实验观察转然反义CXCR4的肝癌细胞的迁移能力的变化。 (6)将稳定转染反义CXCI珥基因的肝癌细胞、转染空白质粒 的肝癌细胞及未转染的肝癌细胞注射到Balb／c裸鼠右后肢背侧皮下， 定期观察肿瘤生长情况，10周后处死Balb，c裸鼠，切下生长的肿瘤 组织，称重，比较各组间是否存在差异。同时切取布局肿大的淋巴结 和裸鼠肺组织，提取总黜淞足r．PCR检测肿瘤转移情况。 结果 1．63士1．26；CXCR4蛋 的相对表达量分别为2．52士1．13。2．3钍1．16姐d and 白的相对表达为1．38土O．13，1．96士o．321．86士0．21。在正常肝组织中 均未检测到CXCR4IIl】卧队及蛋白的表达。 (2)在43例肝癌患者中，癌性腹水定量检查结果显示，cxcLl2 111】RNA 含量为783-8，364p咖l，肝细胞癌淋巴结组织中，CXCLl2 表达量的平均值为1．21士0．87，在正常肝组织中未检测出CXCLl2的 表达。 胞的迁移，其趋化指数为1．9士o．8，与对照组(趋化指数为1．O士o．4) 比较有显著差异性(P0．05)。 (4)经PCR和限制性核酸内切酶Eco砒、Ec礴Ⅳ双酶切鉴定， 成功构建了人反义CxcIH基因的重组体pcDNA-X4。 及流式细胞仪从ln】ⅨA水平和蛋白质水平检测C)【CR4的表达，发现 Ⅱ 具有显著性差异(Po．05)。 (6)趋化实验表明，在人重组CXCLl2的作用下，转染 粒的肝癌细胞相比，其迁移能力明显下降，具有显著性差异(Po．05)。 肝癌细胞及未转染质粒的肝癌细胞注射到Balb／c裸鼠右后肢背侧皮 下，观察发现，转染pcDNA—x4组的肿瘤生长较为缓慢，最早第19 天才出现肿瘤，而转染pcDNA3．1(一)组和为转染质粒组最早则在第 15天就出现肿瘤，且肿瘤生长速度明显快于pcDNA-x4组。 (8)第10周后处死Balb，c裸鼠，剥离肿瘤组织，称重，发现 组和未转染组，具有显著性差异(P(0．05)。 。 警 组和未转染组均有局部淋巴结的浸润，虽然在pcDNA(．)组发现一 例局部淋巴结不肿大，而在pcDNA．X．4组虽然有2例局部淋巴结肿 大，但未检测到人Q嗍。切取肺部组织，咫PCR检测发现， 未检测到人GAPDH，提示尚未出现肺部转移。 结论 移，这可能与肝细胞癌的转移有着密切关系。 m (2)CXCIH在88．37％的肝癌组织中表达，说明肝癌的转移除了与 cxcR4，CxCLl2生物轴有关外，还与其他因素相关。 (3)下调CXCR4表达，能有效抑制肝癌细胞的趋化运动，可以抑 制肝癌的转移。 关键词： 肝细胞癌，CXCLl2，趋化因子，CxCIH，细胞迁移， 转移