101-0401HPLC原理-graduate_school-PDA.pdf

高效液相層析法與PDA HPLC High Performance Liquid Chromatography Basic Principle Liquid chromatography Mobile phase: Liquid Stationary phase: Solid or Liquid Samples dissolved in mobile phase can be analysed. Chromatography by M. Tswett ether Chromatography Chromato colors colors chlorophyll chlorophyll CaCO 3 概述 高效液相層析法 （HPLC ；High Performance Liquid Chromatography ）是1960年代末70年代初 發展出來的一種新型分析技術，隨著不斷改進與發 展，目前已成為應用極為廣泛的化學分析方法。它 是在古典液相層析基礎上，引進了氣相層析的理 論，在技術上採用了高壓泵、高效固定相和高靈敏 度檢測器，因而具備速度快、效率高、靈敏度高、 操作自動化的特點。為了更瞭解 HPLC ，現從兩方 面進行比較： 2.HPLC原理、構造 LC的移動相是 液體 ，若靜態固 定相為“固態體 ” (Solid) ，例如 10 μm粒徑的矽膠(Silica Gel)… 等 此 分 析 過 程 稱 之 為Liquid Solid Chromatography （LSC ）。 1、HPLC與古典液相層析法 HPLC 比起古典液相層析法的最大優點在於 高速、高效、高靈敏度、高自動化。高速 是指在分析速度上比古典液相層析法快數 百倍。 由於古典層析是以重力來驅使溶劑流動， 因此溶劑流速極慢；而 HPLC配備了高壓輸 液設備，溶劑流速相當高。 對氨基酸分離，用古典層析法，柱長約170 cm ，柱徑0.9cm ，需用20 多小時才能分離出 20種氨基酸；而用 HPLC只需 l 小時之內即 可完成。 2 、HPLC與GC (l)GC所分析的樣品只限於氣體和沸點較低的化合 物，它們僅占有機物總數的20%。對於占有機物總 數近80%的那些高沸點、熱穩定性差、分子量大的 物質，目前主要採用HPLC進行分析。 (2)GC的流動相是氣體，它對樣品沒有親和力，即不 產生相互作用力，僅起運載作用。而HPLC的流動 相可選用不同極性的液體，選擇性大，它對樣品 可產生一定親和力，並參與固定相對樣品作用的 劇烈競爭。因此，流動相對分離起很大作用，相 當於增加了一個控制和改進分離條件的參數，這 為選擇最佳分離條件提供了極大方便。 (3)GC一般都在較高溫度下進行的，而HPLC則經常 可在室溫條件下工作。 總之，HPLC是吸取了 GC與古典液相層析優點，並 用現代化手段加以改進，因此得到快速的發 展。目前 HPLC已被廣泛應用於分析生物學和醫 藥上有重大意義的大分子物質，例如蛋白質、 核