干旱胁迫对小麦幼苗生理生化指标的影响资料.doc

干旱胁迫对小麦幼苗生理生化指标的影响 摘要：以小麦幼苗为试验材料，研究干旱胁迫对小麦生理生化指标脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O2)、抗氧化酶（PPO、POD）、谷胱甘肽谷胱甘肽谷胱甘肽谷胱甘肽谷胱甘肽] (1)小麦种子发芽率的测定 各取50粒吸胀的小麦种子→沿胚的中心线切成两半（严格区分两个半粒），进行下列实验：其中50个半粒进行TTC染色（30℃水浴 20 min） ，另5010 min） 根据两种方法的染色情况，分别计算发芽率。 0.1g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3 mL 3%磺基水杨酸（SSA）和少许石英砂→充分研磨→用2 mL 3% SSA洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。 ②脯氨酸(Pro)的测定：上清液各2 mL →分别加入2 mL冰乙酸和2 mL茚三酮试剂→煮沸15 min→冷却后→5000 rpm离心10 min（若没沉淀可略此步骤） →分别测定A520, 将测得的结果用公式 Pro content = 计算出正常和干旱生长小麦的胚芽鞘的脯氨酸含量。 (3) 丙二醛(MDA)含量的测定 ①丙二醛(MDA)的提取：分别取0.1 g实验组和对照组→加入3 mL 10%TCA和少许石英砂→充分研磨→用2 mL 10%TCA洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。 ②丙二醛(MDA)的测定：分别取上清液各2 mL →加入0.6%TBA（用10% TCA配制） 2 mL→煮沸12 min→冷却后→5000 rpm离心5 min →分别测定OD450和OD532 将测得的OD450和OD532的数据带入下列公式 OD450=C1x 85.4 OD532 = C1 x 7.4+C2X155000 C1：可溶性糖的浓度，C2：MDA的浓度 解方程计算出C1可溶性糖的浓度，C2MDA的浓度。 (4) 过氧化氢(H2O2)含量的测定 ①过氧化氢(H2O2)的提取：分别取0.1 g实验组和对照组→加入3 mL 50 mM PBS (pH=6.8，内含1mM HA)和少许石英砂→充分研磨→用2 mL PBS洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。 ②过氧化氢(H2O2) 含量的测定：分别取上清液各3 mL →加入0.1%Ti(SO4)2 [用20%(v/v) H2SO4配制] 1 mL→摇匀→ 5000 rpm离心10 min → OD410 将测得的OD410值带入下列公式 H2O2 content = （?mmol.g-1FW）计算出H2O2酶的含量。 (5) 抗氧化酶（PPO、POD）的测定 ①抗氧化酶（PPO、POD）的提取：分别取0.1g实验材料→加入少许石英砂和3 ml50mmol/L PBS, pH6.0,内含0.１mmol/