南京林业大学酶工程动植物细胞发酵产酶资料.pptVIP

第三章 动、植物细胞发酵产酶 80年代以来，生物工程研究和开发的新领域。 动物细胞通过离心分离技术、杂交瘤技术、胰蛋白酶消化等获得； 培养方式有悬浮培养、贴壁培养、微载体培养； 获得疫苗、激素、多肽、单抗等； 植物细胞通过捣碎、酶解、愈伤组织诱导获得； 培养方式有固体培养、液体层培养、悬浮培养等； 主产色素、药物、香精、酶等。 动、植物细胞培养与微生物培养区别 动物细胞无细胞壁，且大多数哺乳动物细胞附着在固体或半固体的表面才能生长；对营养要求严格，除氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或半乳糖外，还需有血清。动物细胞对环境敏感，包括pH、溶氧、温度、剪切应力都比微生物有更严的要求，一般须严格的监测和控制。 植物细胞对营养要求较动物细胞简单。但由于植物细胞培养一般要求在高密度下才能得到一定浓度的培养产物，以及植物细胞生长较微生物要缓慢，长时间的培养对无菌要求及反应器的设计也提出特殊的要求。 第一节 植物细胞培养产酶 从中得到最普遍而必不可少的药物有17类； 全世界用其制备天然芳香化合物的价值超过15亿＄/年； 美国用其生产药物超过30亿＄/年； 我国使用的中草药及其制备大部分来自植物。 植物来源的物质生产几乎采用提取分离法，如从木瓜中提取木瓜蛋白酶； 1902，Haberlandt提出分离植物单细胞培养成株的设想，至今已成为专门学科。 通过植物细胞产酶的进展：表3-1 目前植物细胞发酵产酶概况: 一、植物细胞的特性 表2-2 微生物、植物、动物细胞的特性比较 （P78） 二、植物细胞培养的特点 例如,紫草宁(shikonin)生产，发酵细胞中的紫草宁比 紫菜根(Lithospermum erythrorhizon)中高10倍，比产率达到种植紫草的830倍。 植物细胞培养的特点（续） （2）缩短周期 发酵周期10～30天，种植周期几个月～几年。 （3）易于管理 减低劳动强度；不受地理环境和气候条件等影响。 （4）提高产品质量 主要产物浓度高，易于分离纯化，减少环境中各种有害物质污染和侵蚀。 （5）其它 生物反应器的设计工艺条件注意的问题。 1、外植体的选择与处理 从植株取出，预处理后用于植物组织细胞培养的片段或小块； 选择无病虫害，生长旺盛的植株； 切成小块，消毒，漂洗 植物细胞培养的工艺条件及其控制（续） （三）温度的控制　室温（25℃）、 （四）pH值的控制 微酸性（pH5～6） （五）溶解氧的调节控制 代谢慢，耗氧少，对剪切力敏感，搅拌不宜强烈。 （六）光照的控制 （七）前体的添加　提高次级代谢物的产量。 （八）刺激剂(electior)的应用 　　　强化次级代谢产物的生物合成。常用微生物细胞壁碎片和胞外酶。 四、植物细胞培养产酶的工艺过程 超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内清除超氧化物阴离子自由基(O 2—)的重要金属酶类。它和过氧化氢酶、过氧化物酶一起构成了生物体内重要的酶促反应防御体系，从而维护生物体内细胞正常的生理代谢和生化反应。衰老自由基学说认为衰老源于机体正常代谢过程中产生过量的自由基对机体损害的结果。超氧化物歧化酶(SOD)作为能催化超氧阴离子发生歧化反应的自由基清除剂，具有延缓衰老的作用。 大蒜细胞培养产ＳＯＤ １、大蒜愈伤组织的诱导 ２、大蒜细胞的悬浮培养 ３、ＳＯＤ的分离纯化 第二节 动物细胞培养产酶 1885年Roux最早尝试使组织离体培养，材料是鸡胚神经板，采用生理盐水为培养液，并首次采用组织培养这个术语; 1907年Harrison 和1912年Carrel开始把组织培养作为一种方法，用于研究离体动物细胞的培养; 动物细胞培养产酶 由于组织培养在医学研究中的应用，如抗病毒疫苗的生产等，现已经逐渐发展成为一门精细技术。许多细胞株、细胞系的培育成功，尤其是以人的肿瘤组织为材料建立的各种细胞系，如Hela细胞系（Gey，1952），可用来进行一系列研究，更加促进了组织培养技术的发展; 20世纪50年代,Earle,病毒疫苗细胞培养; 1967,动物细胞贴壁培养微载技术; 1975,杂交瘤技术; 动物细胞可产生较高价值的物质,特别是激素、疫苗，单克隆抗体和酶等动物功能蛋白。 一、动物细胞特性 1,无细胞壁,脆弱; 2,体积比微生物细胞大几千倍,稍小于植物细胞; 3,具有群体效应、锚定依赖性、接触抑制性、功能全能性； 4，营养要求复杂。 二、动物细胞培养的特点 1，主产各种功能蛋白； 2，生长缓慢； 3，需加抗生素防污染； 4，对剪切力敏感； 5，具锚定依赖性，宜贴壁培养；部分用悬浮培养； 6，培养基成分复杂； 7，原代细胞培养50代后需重新分离细胞。 三、动物细胞培养的方式 来自血液、淋巴组织的细胞、肿瘤细胞、杂交瘤细胞等非锚定依赖性细胞采用。 类似于微生物细胞的深层发酵，但工艺条件有较大