沉默N-乙酰糖基转移酶V抑制CNE-2细胞的增殖与转移能力.pdfVIP

沉默糖N一乙酰糖基转移酶V 抑制CNE-2细胞的增殖和转移能力 硕士研究生：李亚辉 指导教师：张健教授 摘要 一、研究背景 鼻咽癌(nasopharyngeal 南方地区，其发病有明显的种族地区和家族地区聚集现象。据估计，世界上 80％的鼻咽癌发生于我国。鼻咽癌发病率占头颈部肿瘤的首位，发病年龄在3—84 岁之间，以30-50岁多见，男性发病为女性的2-3倍。鼻咽癌已经成为严重威 胁我国人民生命和健康的十大恶性肿瘤之一。 鼻咽癌多属低分化鳞状细胞癌，大多数对放射治疗有中度敏感性，其邻近 结构对放射线亦有较高的耐受性，因此，目前治疗鼻咽癌的主要手段是放射治 疗结合全身化疗。但临床发现患者的放射敏感性存在个体差异，导致治疗效果 亦出现很大的不同。影响肿瘤细胞放射敏感性的因素很多，细胞凋亡是重要因 素之一。自1972年Kerr发现自然界存在细胞凋亡现象以来，人们对凋亡的认 识不断加深，并陆续发现了如Bcl-2等一系列的凋亡调控基因，同时也促进了 鼻咽癌细胞凋亡机制的研究。 糖基化是真核生物细胞表面常见的翻译后产物修饰反应中的一种。糖蛋白 中的糖链直接影响着糖蛋白生物功能的发挥。蛋白的寡糖链参与了分子识别以 及细胞与细胞间、细胞与间质问的识别、黏附和受体作用等多种生物功能。糖 链表达量及结构的改变是普遍的恶行生物行为。细胞癌变时癌细胞膜上糖蛋白 糖基可影响细胞的正常功能，如细胞识别和黏附功能障碍，是导致细胞恶性转 中文摘要 化的分子基础研究n1。而异常糖基化常因肿瘤细胞高尔基体上的糖基转移酶表 达水平改变所致。N一糖链分支增多常与肿瘤的转移相关，如N一乙酰氨基葡萄糖 转移酶(GnT—V，Mgat5，能够催化形成形成B l，6一乙酰氨基葡糖分支结构)。 许多研究以表明，GnT—V活性增高以及其糖基化产物增多与细胞活力、浸润能力、 以及转移能力密切相关。GnT—V活性在许多恶性肿瘤组织中表达增高，如乳腺癌、 肝癌、神经母细胞瘤、胆管癌以及鼻咽癌等，但是在非小细胞肺癌中恶性程度 越高，其表达量越低瞻1。 关于RNA干扰(RNA 链RNA(double—strandedRNA，dsRNA)引发的广泛存在于生物体内的序列特异 性基因转录后的沉默过程。细胞中的核糖核酸酶Ill家族成员之一的，dsRNA特 interferingRNA，siRNA)，随后siRNA作为介导子引起特异性地降解相同序列 的mRNA，从而阻断相应基因表达的转录后基因沉默机制臼吲。 肿瘤分子靶向治疗是指在肿瘤分子细胞生物学的基础上，利用肿瘤组织或 细胞所具有的特异性(或相对特异的)结构分子作为靶点，使用某些能与这些靶 分子特异结合的抗体、配体等达到直接治疗或导向治疗目的的一类疗法。分子 靶向药物以某些肿瘤细胞膜上或细胞内特异性表达的分子为作用靶点，从而能 够更加特异性地作用于特定肿瘤细胞，阻断其生长、转移或诱导其凋亡，抑制或 杀死肿瘤细胞，达到控制肿瘤的目的[7嘲。 二、研究目的 鼻咽癌是我国的高发肿瘤，目前关于GnT—V表达与鼻咽癌关系的相关研究 较少，本试验利用RNAi原理及技术，合成针对多数肿瘤细胞鼻咽癌中高表达基 变化对鼻咽癌细胞株体内增殖及转移能力的影响。目的就在于能否在鼻咽癌的 分子靶向治疗中找到一个新的靶点，并提供客观试验依据。 三、实验方法 Ⅱ 硕士学位论文 1、GnT-V shRNA质粒制备：由上海吉玛公司完成。 G418的RPMI·1640 ℃5％C02条件下，培养于含10％新生牛血清及2000ug／ml 中，每周传代2～3次。CNE．2细胞培养至对数生长期。 3、裸鼠皮下成瘤实验 X10 取对数生长期的细胞，调整细胞浓度为2．5 7／mL，按100I_tL／只进行臀部 每组4只。在2周内每隔2天测量瘤体的长径、短径