大丽花离体快繁与再生体系的建立.pdf

JJ[irllllllll[1l[1／lllllllllllPIiJJllPijl[PrlllUf 摘要 Y2 143691 栽观赏，是世界著名的园林绿化材料。建立大丽花组培快繁和高效再生体系，可为优 良株系的规模繁殖、种质保存以及遗传转化体系建立奠定基础，对通过基因工程实现 大丽花种质资源创新具有重要意义。本试验研究了不同因素对大丽花常规快繁和高效 再生的影响，其中，重点研究了离体叶片高效再生技术体系，主要结果如下： 一、常规快繁 ①以大丽花茎尖和带腋芽茎段进行外植体比较试验，结果表明，以带腋芽茎段为 S，再用 外植体材料较好，成活率可达到75％；灭菌方法为： 先用70％的酒精消毒30 000 min，之后接种到含2 O．1％升汞或5％的次氯酸钠(滴加1～2滴吐温20)消毒4 m∥L 活性炭的初代培养基上，以获得无菌株系。 0．5 ②适宜的壮苗培养基为：MS+6．BA mg／+蔗糖50 mg／L+NAA0．3 g／L+琼脂6．5 50 g／L+B9mg／L。 ③最佳的增殖培养基是MS+6．BA4 mg／L+NAAO．1m∥L，增殖系数可达到6．8。其 6．0 O．01 次为MS+KTmg／L+NAAmg／L，增殖系数为5．3。其中，蔗糖为30g／L，琼脂 0002 000 为6．5g／L；培养室温度为25。C-4-2℃，光照培养处理的光强为1 lx，光周 期为14h光照，10h黑暗。 0．1～O．3 ④适宜生根的培养基是I／2MS+NAAmg／L+30g／L蔗糖+6．5g／L琼脂粉， 生根率可达92．0％，平均生根数为10．9。 二、高效再生 以大丽花无菌苗叶片、叶柄、茎段为试材，采用正交试验设计，对影响离体再生 计，并对叶片生理状态及暗培养天数等因素进行了研究。结果表明： ①以叶片、叶柄和茎段为试材进行离体再生时，离体叶片的再生效果最好，其不 d叶龄，长度为 定芽再生率显著高于叶柄和茎段；最佳生理状态为顶部充分展开的25 2cm左右的幼嫩叶片。 ②实现了大丽花离体叶片两种途径的高效再生。一是通过愈伤组织途径的再生， 培养基为：MS+6一BA3 mg／L+IBA0．2megi，愈伤组织的诱导率为76．4％，再生率高达 88．0％，平均再生不定芽个数为7．5；二是不通过愈伤组织的直接再生，培养基为： MS+KT7．0 0．05 mg／L+NAAmg／L，再生率为86．O％，平均再生不定芽个数为5．8。 d后转到光下培养，愈伤组织诱导率显著提高至J]89．O％。所 ③离体叶片暗培养15 建立的大丽花无菌苗离体叶片高效再生技术体系，再生率可保持在86．0％左右，平均 再生不定芽个数可提高到8．1个