组合靶基因传感器芯片及自动检测仪精要.pptVIP

组合靶基因传感器芯片 及自动检测仪 负 责 人：府伟灵 负责单位：西南医院检验科 将压电传感器技术与基因芯片技术相结合 适合临床基因检测的组合靶基因传感器阵列及其自动检测仪 1.应用 疾病诊断 基因突变检测 环境监测 2.仪器特点 价格低廉、便于携带 使用方便、可实时监测 无需标记、可长期保存 检验灵敏度高 可同时检测多个标本或同一标本多个基因 微型压电传感器阵列芯片的研制 压电谐振阵列自动检测系统 基因传感器芯片及封装、进样系统 基因检测仪及应用软件 特异性探针的设计和合成 各种疾病标本的收集、保存与处理 确定相应的检测项目对比实验 一.杂交反应动力学等研究 离子强度对杂交效应的影响 温度对杂交效应的影响 探针浓度对杂交效应的影响 靶序列浓度对杂交效应的影响 碱基不匹配对杂交效应的影响 不同结合位点对杂交效应的影响 不同探针长度对杂交效应的影响 靶序列长度对杂交效应的影响 金、银膜作传感器电极时检测对比 扫描隧道显微镜观察 1.离子强度对杂交效应的影响 频率变化值随离子强度增加而增加 石英晶体的振荡性能受溶液电解质浓度的影响 缓冲液NaCl浓度以0.2M较为适宜 2.温度对杂交效应的影响 随温度增加，杂交时间有缩短趋势，杂交前后的频率差值逐渐减小 3.探针浓度对杂交效应的影响 杂交效率与探针的初始浓度有关。探针浓度增加，杂交所致频率变化值增大，但浓度过高时(1.0、3.5uM)，频率变化值反而有所下降。其原因可能主要与探针的空间排列结构和DNA分子间的静电排斥有关。 4.靶序列浓度对杂交效应的影响 靶序列浓度增加（从0.005uM到3.5uM），杂交所致频率差值逐渐增大，Δf与[target]0呈一饱和曲线关系。靶序列浓度为0.001uM、0.0001uM时，传感器未能检测出频率变化，此为灵敏度受限所致。提高灵敏度有多种方法，但在实际应用中的可行性还需进一步探讨。 5.碱基不匹配对杂交效应的影响 不匹配碱基数增加，靶序列与探针之间的结合率明显降低，而其离解率明显增高，表明碱基不匹配使DNA双链之间结合力减弱，更易离解。 实验提示，应用压电传感器阵列技术可以判断两条互补链之间碱基不匹配情况，显示其具有很好的特异性。 6. 不同结合位点对杂交效应的影响 靶序列分别在其3’端、5’端、及中间段与20碱基的探针互补杂交时，频率差值无明显差异，而中间段杂交时间有所延长。 7.不同探针长度对杂交效应的影响 在压电传感器上应用较长的DNA分子进行杂交检测时，频率效应更大，能更清楚地反映杂交情况，使实验误差更小。 8.靶序列长度对杂交效应的影响 短链靶序列(20~108个碱基) 碱基数与△ｆ呈线性关系，而长链靶序列(225、379、654bp)时△ｆ增大趋势明显减缓。 9. 金、银膜作传感器电极检测对比 检测基因时的稳定性、反应时间、频率变化幅度以及杂交动力学测定等方面均无显著差异。 10. 扫描隧道显微镜观察 针尖为电化学腐蚀的钨丝，以恒电流方式进行图像采集，在大气压和室温条件下，在纳米级水平直接观察金属膜表面形态学变化。 二.压电谐振阵列自动检测系统 1.电路系统 通道选择电路 压电谐振电路 差频电路 自动增益电路 温度补偿电路 计数电路 自动寻址电路 计算机接口电路 2. 2×5型传感器阵列 AT切型 基频10MHz 晶膜直径4.0mm 灵敏度0.1ng 3.软件系统 数据多道采集模块 数据分析模块 数据统计模块 结果报告模块 4.检测仪 包括系统组合、外型设计及配套部件等工作目前已初步成形。 四.检测MRSA的应用研究 准确而快速地检测耐甲氧西林葡萄球菌( MRS )，是有效控制其流行的关键，目前主张从耐药基因型进行检测诊断。 应用压电传感器阵列，同时检测作为MRS耐药标志的mecA基因和金黄色葡萄球菌特有的femA基因，并与其它常用方法进行了对比，探讨应用压电传感器阵列技术检测MRSA的可行性。 统计分析显示：频率变化与靶DNA浓度显著相关，呈指数函数关系，并有关系式： mecA [C]＝0.0003×e0.0414△F femA [C]＝0.0003×e0.0336△F 从本实验可知，与其它检测方法相比，应用压电传感器阵列检测临床基因样品将有许多优势： ①可以进行液相杂交定量检测 ②可以进行DNA实时检测 ③可以对多种DNA样品同时检测 ④特异性强 ⑤无污染 五.相关专利 国内专利 组合靶基因自动检测方法及采用该方法的检测仪. 公开号: CN 1261667A 组合靶基因自动检测仪. 申请号2 微型石英谐振阵列基因传感器芯片.申请号0 国际专利 组合靶基因自动检测方法及采用该方法的