细胞生物学技术细胞生物学课件精要.pptVIP

* 1、我们过去和现在怎样了解细胞？ 2、怎样探索细胞的更多奥秘？ 第二章 细胞生物学技术 对细胞及其大分子进行 观察 分析 操作 一.显微镜技术 microscopy －观察细胞和细胞器的技术 1.光学显微镜 light microscope 普通光学显微镜、荧光显微镜、暗视野显微镜、 相差显微镜、激光扫描共聚焦显微镜 2.电子显微镜 electronic microscope 透射电子显微镜、扫描电子显微镜 3.扫描探针显微镜 普通光学显微镜 倒置光学显微镜 基础上的显微操作仪 这是什么？ 不同显微镜观察到的细菌形态 这是什么？ 倒置显微镜下培养细胞 光镜下培养细胞（β半乳糖苷酶检测） 细胞核 内质网 细胞骨架 这是什么？ 荧光显微镜显示同一细胞中的多种结构成分 细胞核 内质网 细胞骨架 透射电镜（20世纪80年代初和90年代末） 这 是 什 么 ？ 透射电镜：显示细胞内部超微结构 依据电镜照片提出的细胞凋亡形态学模型 扫描电镜（20世纪80年代初和90年代末） 扫描电镜： 显示细胞表面结构， 图像富于立体感 这是什么？ 二.细胞化学技术 cytochemistry －观察大分子的技术 1.酶细胞化学技术 enzyme cytochemistry 是用组织化学和细胞化学的方法证明酶的 存在和位置的技术。 2.免疫细胞化学技术 immunocytochemistry 利用抗原与抗体能特异结合这一特点， 通过特异的免疫细胞化学反应来显示 细胞中的特异分子。 * * 酶细胞化学技术：定位细胞中的酶 CMP酶，位于溶酶体 （电镜照片） back β半乳糖苷酶，位于溶酶体。 衰老细胞中堆积 （光镜照片） 免疫细胞化学技术：定位细胞中大分子 大肠腺癌细胞呈Ki-67阳性 免疫荧光三标记显示细胞骨架成分 （绿荧光）与其他结构的位置关系 3.原位杂交技术 in situ hybridization 此技术将分子生物学与细胞化学技术结合 起来,以标记好的核酸分子为探针,在组织 细胞原位检测特异核酸分子的技术。 * 原位杂交：显示核酸分子定位 鼠肺纤维化模型： TGF-beta 的mRNA表达增多， 主要位于支气管上皮细胞 三.分析细胞学技术（即定量细胞学技术） - 分析细胞及其大分子的技术 定量分析细胞各种形态参数、生物学 特征、细胞化学成分的组成和含量，以及 细胞的各种功能的技术。 分析细胞学技术可分为二个领域 1、固定式细胞分析 2、流动式细胞分析 1.固定式细胞分析(看见形态图像) 常用仪器包括： 显微分光光度计 图像分析仪 激光共聚焦显微镜 对组织细胞甚至活细胞进行结构和成分的定位和定量分析。 2.流式细胞术 flow cytometry (看不见形态图像) 高速度地自动分析单个细胞的多个生物学特 征或多种细胞生化成分的含量，一般在1-2分钟内 就能完成对细胞大群体的定量分析测定。 流式细胞仪 四. 细胞结构成分的离心分离技术 - 操作并分析细胞和细胞器的技术 破碎细胞（匀浆） 分散细胞器和颗粒成分 离心分离 （差速分离、移动区带离心、等密度离心） 1974年诺贝尔 生理医学奖 -De Duve发现溶酶体 （密度梯度离心） 技术推动细胞生物学研究的光辉范例： *