化学发光技术资料.ppt

化学发光技术 ?概念：某些化合物分子吸收化学能后，被激发到激发态，再由激发态返回至基态时，以光量子的形式释放出能量，这种化学反应称为化学发光反应，利用测量化学发光强度对物质进行分析测定的方法称为化学发光分析法。 化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生发光(?光辐射)?。所吸收的能量来源不同。 化学发光反应两个关键步骤：化学激发和发光。 故化学反应要成为发光反应，必须满足两个条件： 1.反应必须提供足够的能量（ 170 ～ 300KJ ／ mol ）； 2. 这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发态，并且有足够的光量子产率。 发光效率：指发光剂在反应中的发光分子数与参 加反应的分子数之比。一般化学发光反应，值约 为 10 － 6 常见化学发光剂 直接：吖啶酯类 三联吡啶钌 间接：酶促化学发光剂 （辣根过氧化物酶---鲁米诺及其衍生物， 碱性磷酸酶----AMPPD） 酞箐，二甲基噻吩衍生物等（活性氧） ? 条件： 碱性PH8.6 催化剂： 辣根过氧化物酶，氧化血红素等 氧化剂：过氧化氢，高锰酸钾，碘等 量子产率：0.05----0.15 应用： 检测血迹 425nm 470nm 条件：碱性 氧化剂：过氧化氢 应用：标记半抗原和蛋白质 不需要催化剂 优点：背景发光低，干扰因素少，发光效率高，易于蛋白质联接，且不影响自身 三联吡啶钌Ru(byp)3+2 电化学发光剂 可直接标记抗原抗体 发光剂的常见标记技术 1.碳二亚胺缩合反应（酰胺键） 2.重氮盐偶联法 3.过碘酸钠氧化法 化学发光免疫分析技术 CLIA 上世纪70年代中期Arakawe首先报道CLIA? 是目前发展和推广应用最快的免疫分析方法也是目前最先进的标记免疫测定技术 优点：灵敏度高、特异性强、试剂价格低廉、试剂稳定且有效期（6-18个月）、方法稳定快速、检测范围宽、操作简单自动化程度高等 化学发光免疫分析(CLIA)是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合。 应用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。 固相分离（板） 过滤分离（膜） 珠式分离（固相分离:材质(聚苯乙烯珠子）） 顺磁性颗粒分离（固相分离：材质（内含三氧化二铁的聚苯乙烯的小颗粒））首选 化学发光免疫分析包括： 直接化学发光免疫分析 化学发光酶联免疫分析 电化学发光免疫分析 ?直接化学发光免疫分析：用化学发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫测定方法（吖啶酯类） 抗体 吖啶酯 样本待 测抗原 抗体 吖啶酯 样本待 测抗原 过氧化氢， 碱性环境 抗体 样本待 测抗原 发光 化学发光酶免疫分析(CLEIA)属酶免疫分析，只是酶反应的底物是发光剂，操作步骤与酶免分析完全相同：以酶标记生物活性物质进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在信号试剂作用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP )和碱性磷酸酶(ALP)，它们有各自的发光底物。 特点：1.属酶免疫测定范畴 2.酶标记抗原或抗体结合稳定 3.酶催化鲁米诺，AMPPD等发光剂发出的光稳 定，持续时间长，便于记录和测定