乳膏剂微生物限度检查验证方案.docVIP

目 录 确认目的 2 2. 参考文件 2 3. 试验器材 2 4. 菌液制备与检验 2 5. 需养菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证 3 6. 控制菌检查方法的验证 4 7. 试验结果 5 8.验证结论 9 1.目的 确认对供试品进行微物限度检查时，所采用的需养菌、霉菌和酵母菌计数方法及控制菌检查方法是否适合于该药品的微生限度检查。 2.参考文件 《中国药典》2015版四部 3.试验器材及样品 3.1培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、 麦康凯琼脂培养基、麦康凯液体培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、十六烷基三甲铵琼脂培养基。 以上培养基均由北京三药科技开发公司生产 3.2菌种 大肠埃希菌（scherichia coli) [CMCC(B) 44102] 枯草芽孢杆菌（Bcillus scbtilis ) [CMCC(B) 63501] 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus ） [CMCC(B) 26003] 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ) [CMCC(B) 10104] 白色念珠菌（Candida albicans) [CMCC(F) 98001] 黑曲霉 （Aspergillus niger) [CMCC(F) 98003] 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉均由中国医学菌种保藏中心提供 3.3环吡酮胺乳膏 批号151201、151202、151203 4.菌液制备与检验 4.1取经30-35℃培养18-24h的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养基培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释，金黄色葡萄球菌稀释至10-7、枯草芽孢杆菌稀释至10-5、大肠埃希菌稀释至10-7，约为50～100cfu/ml，备用。 4.2取经20-25℃培养2-3天白色念珠菌的沙氏葡萄糖液体培养基的培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5，约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。 4.3取经20-25℃培养5-7天黑曲霉的沙氏葡萄糖液体培养基的培养物，加5ml含0.05%（ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。吸取出孢子悬液，用0.05%（ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-4，约为50～100cfu/ml，备用。 上述各株菌的培养物均为第三代的培养物。 4.4菌液的检验 4.4.1取上述金黄色葡萄球菌107、枯草芽孢杆菌105、铜绿假单胞菌107的稀释液各1ml，分别用45℃胰酪大豆胨琼脂培养基20ml注皿，各平行测定两个平皿，30-35℃培养逐日观察计数，应约为50～100cfu/ml。结果见 表1 4.4.2取上述白色念珠菌105稀释液及上述黑曲霉104孢子悬液各1ml,分别用45℃沙氏葡萄糖琼脂培养基20ml注入平皿，各副行测定两个平皿，30-35℃培养逐日观察计数，应约为50～100cfu/ml。结果见表1 5.需养菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证 结果见 表2-7 照中国药典2015版微生限度检查法（中国药典2015年版四部1105、1106）中微生物计数方法和控制菌检查法进行试验。 供试液的制备：取供试品10g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液到100ml，制成匀浆液，作为1：10的供试液。 5.1考虑