牦牛病毒性黏膜病病毒结构蛋白核苷酸的序列测定与分析.pdfVIP

第38卷第4期 JuI．2012 ……‘一 JournalSouthweSt N学at版urall ScienceEdition ofs。uth蠹南Un民iv族ers大ity学fo学rN报ati。on自al然itie苎s 文章编号：1003-2843(2012)04-0564-06 牦牛病毒性黏膜病病毒结构蛋白核苷酸 的序列测定与分析 刘亚刚，孙凯，王妍，王盼盼，王荣，胡炳峰，王文伯 (西南民族大学生命科学与技术学院，成都610041) 籀要：对首次从托牛体内分离出的BVDV进行结构蛋白的研究与分析具有重要的理论价值争学术意义，奉研究参考 至pMDl9-T 较分析，克隆得到的结构蛋白基因与NADL株同源性最高，但核苷酸同源性仅为70．1％推导氨基酸同源性仅为74．49缸 证明牦牛株BVDV结构蛋白基因存在较大的变异．生物信息学分析表明结构序列中有片段高度疏水，蛋白基因推导氨 基酸序列亲水性与抗原性成平行相关，亲水性和抗原性与标准毒株很相似． 关键词：牦牛病毒性腹泻病毒；结构蛋白基因；克隆测序；生物信息学分析 中图分类号：$858．23 文献标识码：A doi：10．3969／j．issn．1003·2483．2012．04．13 牦牛是一个特有的生物物种，一般生活在2500m以上的高海拔地区．我国是拥有牦牛数量最多的国家，占 种以腹泻消化道黏膜脱落为主要症状的传染病，该病在牦牛群中流行较广，造成极大危害(高双娣，1999；刘亚 刚等，2003)““，后经流行病学、病原学诊断为牦牛病毒性腹泻，粘膜病，并从病牛中分离鉴定出牦牛病毒性腹泻， 粘膜病病毒fval(株)．对于BVDVYak株的研究，国内外大多停留在病原学、流行病学、病理变化等领域，而分 子生物学领域几乎无人问津，因此，开展分子生物学研究势在必行，且意义远大． BVDV基因组为单股正连RNA，基因组由5’非翻译区(5-untranslated 框(Openreadingframe，ORF)和3’非编码区(3-non-coding R，eta／,1993； C，et Hertig ChenTet 苷酸序列，为牦牛BVDV结构蛋自的研究提供基础资料． 1材料 1．1细胞及毒株 程”(2000年版)的方法制备，Yak毒株购自中国兽医药品检察所． 收稿日期：2012．06-05 作者简介：刘亚刚(1959-)，男。四川越西人，教授，博士，研究方向：兽医免疫学．电子邮箱：LYG_068@163．eom． 基金项目：IglJ l省科技厅攻关项Iil(04ZY0294X)6-04)；国家民委项(07XN03)． 万方数据 第4期 刘亚刚等：牦牛病毒性黏膜病病毒结构蛋白核苷酸的序列测定与分析 565 1．2主要工具酶及试剂 DNA聚合酶、T4 RNAPCR DNA连接酶、Tirzol试制金(RNAiso RT—PCR DL2000、 Kit(AMV)Ver．3．0、PrimeScriptKit)购自宝生物工程(大连)有限公司；DNA分子量标准Marker DLl0000；糖凝胶DNA回收试剂盒，质粒提取试剂盒购自天根生49年：l-技有限公司． 1．3工程菌及克隆载体 工程菌E．coliJMl09，由本实验室制作并保存；PMDl9-TVector质粒购自宝生物工程(大连)有限公司． 2方法 2．1引物的设计与合成 物序列及位