转录因子T-bt、Eomes和IL-33对CD8+记忆和效应T细胞抗肿瘤的作用机制.pdfVIP

转录因子T-bet、Eomes 和IL-33 对CD8+记忆和效应T 细胞抗肿瘤的作用机制 中文摘要 中文摘要 机体的抗肿瘤免疫主要为 T 淋巴细胞所介导，其中 CD8+细胞毒 T 淋巴细胞 （CTLs ）及CD4+ Ⅰ型辅助T 细胞 （Th1 cells ）介导的I 型适应性免疫应答是抗肿 瘤免疫的基础。T-bet 和Eomes 是调控CD4+Th1 cells 和CD8+CTLs 等I 型效应T 细胞分化和功能的重要转录因子。已有研究表明，肿瘤患者的生存期与转录因子 T-bet 和Eomes 表达密切相关：肿瘤浸润淋巴细胞（TILs ）中T-bet 和Eomes 表达 水平高的癌症患者生存期显著延长。最近的研究结果显示 T-bet 和 Eomes 在由 CD8+T 细胞介导的抗肿瘤免疫应答中发挥重要调节作用，但其中涉及的机制，各 家报道不一。免疫记忆是适应性免疫应答的重要特征之一。记忆 T 细胞是一具有 异质性的群体，主要可以分为三个不同的亚群：效应性记忆T 细胞（effector memory T cell，TEM ）、中枢性记忆T 细胞（central memory T cell，TCM ）和干细胞样记忆T 细胞（T memory stem cells，TSCM ）。已有报道，T-bet 和Eomes 参与效应T 细胞和 记忆T 细胞功能及分化的调节，但两者对干细胞样记忆T 细胞（TSCM ）的作用尚 不清楚，有待进一步探讨。 此外，既往的研究主要集中于T-bet 和Eomes 在淋巴器官中对T 细胞的作用， 然而T-bet 和 Eomes 在炎症组织（包括癌组织）中对CD8+T 细胞分化和功能的作 用及确切的机制尚未阐明。IL-1 家族成员IL-33 在细胞坏死过程中被释放到组织微 环境中，发挥危险信号的作用从而促进炎症反应。本课题小组前期研究发现，T-bet 和Eomes 参与调控CD8+T 细胞表面IL-33 受体ST2 的表达。鉴此推测，T-bet 和 Eomes 通过调控IL-33 ／ST2 信号转导增强CD8+效应T 细胞在炎症组织中的功能。 针对上述未解决的科学问题，本论文开展了以下研究： 第一部分 T-bet 和Eomes 对CD8+记忆T 细胞亚群形成 及其抗肿瘤作用的调控 【目的】研究过继性移植后，转录因子T-bet 和Eomes 对受者体内记忆T 细胞 I 中文摘要 转录因子T-bet、Eomes 和IL-33 对CD8+记忆和效应T 细胞抗肿瘤的作用机制 亚群形成以及记忆T 细胞抗肿瘤效应的调控作用。 【方法】自B6-LY5.2/Cr 小鼠皮内接种3×105 B16F0 黑色素瘤细胞，移植6 天 后小鼠接受非致死剂量辐照，24 小时后移植5×105 经Th1 条件下诱导培养3 天的 WT, T-bet−/− (TKO), Eomes−/− (EKO)或者T-bet/Eomes doubly deficient （DKO ） pmel-1-T 细胞，建立过继性移植荷瘤动物模型，隔日测量并记录肿瘤生长情况。 为分析过继性移植T 细胞在预防肿瘤生成中的作用，B6-LY5.2/Cr 小鼠接受非致死 6 剂量辐照，24 小时后移植4×10 经Th1 条件下培养4 天的WT, T-bet−/−, Eomes−/− 或者T-bet/Eomes DKO pmel-1-T 细胞，1 个月后各组小鼠均皮内注射2×105 B16F0 黑色素瘤细胞，隔日测量记录肿瘤生长情况。自各组小鼠的脾脏、淋巴结以及实 体瘤组织中分离获得单细胞悬液，并通过流式细胞检测技术检测细胞上 CD44 ， CD62L 等表面分子以及IFN-γ 和IL- 17 等胞浆内细胞因子的表达水平，进一步分析 T-bet 和Eomes 在CD8+记忆T 细胞各亚群形成中的作用以及T-bet 和Eomes 对记 忆T 细胞抗肿瘤效应的作用。 【结果】（1）移植了WT, TKO 或者EKO pmel-1-T 细胞