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摘 要
PRRSV是引起猪繁殖与呼吸障碍综合征的主要病原，其分为两个血清型：美洲型和欧洲
型。美洲型自1995年底以来一直在中国内陆流行，给我国养猪业带来巨大损失。2011年田
克恭等报道在中国大陆首次发现欧洲型PRRSV。如何对PRRSV及时有效的鉴定，是减少经济
损失，保护畜牧业健康有序发展的前提。由于单克隆抗体较高的灵敏性和特异性，以及其相
关操作简单、廉价等特点，所以利用单克隆抗体的诊断方法在疾病的检测中得到广泛的应用。
本课题开展了能够同时识别美洲型和欧洲型PRRSV的杂交瘤细胞株的制备及鉴定，为后续检
测试剂盒的研发做好铺垫。
明原核表达的融合蛋白是以包涵体的形式存在，复性后wcstem
boltting检测证明其具有较好
的抗原性。利用Ni2+一NTA树脂亲和层析纯化后的融合蛋白经三次免疫和一次加强免疫Balb／c
N002
小鼠后进行融合，经过四次亚克隆和间接ELISA的筛选，最终获得了两株单抗(NA
高的稳定性。抗体亚型均为l902b。杂交瘤细胞的染色体数目为100和105，腹水纯化后只
NA
加实验证明两株单抗识别的为同一抗原位点。ORF7分段表达后发现这两株只与ORF7的上
半段发生反应。后经序列比对和相关文献报道将抗原位点初步定位于25．30aa和51-58aa。
关键词：PRRSV；N蛋白：原核表达：间接ELISA；单克隆抗体
Abstract
。PRRSVisthemain thatcauses and
antigen porcinereproductiverespiratorysyndrome，two
mainPRRSV and has
genotypes：European(EU)typeAmerican(NA)type．TheEuropeantype
been mainlandChinasincetheendof1995；PRRS losstothedomestic
torturing bringgreat pig
in2011 thatthe PRRSVwasfoundin
raisingindustry．TianKegongreported Europeantype
mainlandChinaforthefirsttime．Since and measuresto
then，precautionscontrolling finally
eliminatesuchdiseasebecamea in and
majorchallengeChina．Therefore，accurate
timely
examinationofthe isthe to suchdiseasefrom and
pathogenykeypreventing spreading．Accurate
in this
monoclonai theexaminationof diseaseforits
specific antibodie(McAb)iswidely
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